接种、移栽况调查.doc

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1、接种、移栽情况调查（一）褐化（酚污染）有些材料离体后很容易褐变，甚至接种后由于外植体不断分泌一些物质，使培养基变成褐色或淡赤红色，严重影响外植体的起动、分化和生长。这是初代培养过程中经常遇到的一个问题。1．引起褐变的原因褐变产生的原因主要是由于外植体由自养变为异养，细胞代谢发生变化，产生一些植物碱，如单宁等酚类物质而引起的。这些酚类物质受多酚氧化酶激活，使酚类物质被氧化后产生醌类物质，这些物质一般呈棕褐色，随着植物体或愈伤组织褐变browning定义：在离体培养中，由于培养组织中的多酚氧化酶被激活，使细胞的代谢发生变化，酚类物质被氧化棕褐色的醌类物质，使培养物及培养基变成褐色的现

2、象。引起褐变的因子：①植物品种。有些植物材料不会褐变，而有些植物则很容易引起褐变；②生理状态。一般分生组织产生醌类物质少，褐化程度低，而已经分化了的组织产生醌类物质多，褐化较严重；年幼的材料含醌类物质少，而成年的材料含醌类物质多。③取材季节。一般冬春季取材褐变轻，夏秋季取外植体接种时褐变严重。④培养基成分。培养基中无机盐成分高，附加植物激素浓度高。⑤培养条件不当。以及培养温度高时，都可以使褐变程度加重。2．防止褐变的方法（1）选择合适的外植体。根据影响褐变的因素来选择不容易引起褐变、并具有较强的分生能力的外植体。选用幼年的材料，且对取材的时期、季节，甚至于时间要进行试验，根据试验

3、及前人的经验选择最合适的时期和部位进行接种。（2）加入抗氧化剂。使用抗氧化剂、半胱氨酸及其盐酸盐、二硫苏糖醇、谷胱甘肽、抗坏血酸等。该类药剂一般需用浓度为50-200mg/L。用经过滤灭菌的药液洗涤刚切割的外植体伤口表面，或加入固体培养基的表层，或将刚切割的外植体浸入其中一定时间。（3）加入活性炭。活性炭是一种吸附剂，在培养基中加入0.5％-2％的活性炭可以明显地提高芽和根的分化频率。因为活性炭可以吸附组织培养过程中所产生的植物碱、醌、单宁等酚一类的有毒物资和气体，促进植物的生理活动及分化生长。但是由于活性炭的吸附作用是无选择性的，除能吸附有毒物质外，也能吸附其它有效的营养成分，

4、因此，在配培养基时对其重要成分应适当多加一点。由于活性炭制作过程附着酸性，而且易产生沉淀，在调pH时一定多搅拌均匀，以免使培养基PH值过酸不凝固。（4）改变培养方式和条件。用静止的液体浅层培养，或放在摇床或转床上进行振荡和转动培养，都可以加快外植体与培养液之间的分子交换速度，加速褐化物质的外渗作用，促进外植体的代谢活动及物质的吸收，使外植体旺盛生长，可以大大减轻褐变。在初期进行暗培养及保持较低的温度（15℃-20℃）时，也能降低褐变作用。必要时也可以用液体振荡培养与固体培养交替进行，促进外植体早些摆脱褐变对它的不良影响，尽早进入生长分化阶段。（5）及时移动或更换新的培养基。外植体

5、接种到固体培养基或液体培养基时，由于外植体不断分泌的植物碱等有毒物质渗透到培养基中，培养时间越长，培养基中的有毒物质就越多，特别是在外植体周围的培养基，往往引起褐色加深，其毒害加重。因此，接种后经常变更外植体在培养基上的位置，也可以减少有毒物质的积累和毒害的加重。经常更换新的培养基对克服褐变也是非常有效的措施。对容易褐变的材料可间隔12～24小时培养后，再转移到新的培养基上，这样经过连续处理7～10天后，褐变现象便会得到控制或大为减轻。（二）玻璃化苗1．玻璃化苗的症状及严重性玻璃化vitrification定义：植物组培过程中特有的一种生理失调和生理病变，表现为组培苗生长异常，幼

6、叶和嫩梢呈半透明、水浸状；整株矮小肿胀、失绿；叶片皱缩卷曲，脆弱易断，这种现象通常称为玻璃化。从进一步分析看出，玻璃化苗体内含水量高，而叶绿素、蛋白质、纤维素和木质素等干物质含量低。光合作用能力和酶的活性降低，组织器官畸形，功能也不全，分化能力逐渐降低至完全丧失，严重时不能分化根。一旦形成玻璃化苗就很难恢复成正常苗，严重影响繁殖率，给生产造成很大损失。所以玻璃化苗问题是植物组织培养快速繁殖中亟待解决的问题之一。2．产生玻璃化苗的因素（1）琼脂和蔗糖浓度的影响。琼脂浓度低，硬度差，玻璃苗发生较严重；相反，如果琼脂浓度和纯度增加，培养基硬度增加，玻璃化现象减少或不产生。蔗糖浓度增加也

7、可以减少玻璃苗的产生，在一定范围内，蔗糖浓度越高，玻璃化苗产生的几率越低。琼脂和蔗糖会影响细胞的渗透压和水势。另外，用水培也比较容易形成玻璃化苗。（2）6-BA浓度对玻璃苗化的影响。目前快速繁殖中多数都用6-BA。6-BA除低廉（国产）外，它对很多植物芽的分化、苗的增殖是不可少的调节物质，所以一般在初代和继代培养过程中都离不开它，并且为了加速芽的分化往往用的浓度比较高。所以，试管苗继代时间越长，体内积累的6-BA浓度就越高。很多试验证明，培养基中6-BA浓度和玻璃化苗产生频率呈正