免疫学的临床应用ppt课件.ppt

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1、免疫学的临床应用免疫诊断免疫治疗免疫预防免疫学诊断一、抗原或抗体的检测二、淋巴细胞的测定三、免疫学检测方法的应用免疫学诊断（一）抗原抗体反应的原理免疫学诊断一、抗原或抗体的检测1、抗原抗体反应的特异性（1）特异性：基于两种分子间的结构互补性和亲和性。（2）可逆性（3）适宜的条件：电解质、pH、温度等2、抗原抗体反应的可见性抗原抗体按适当比例结合，形成肉眼可见的现象。应用1、利用已知抗原检测未知抗体（1）检测病原微生物的相应抗体以辅助诊断疾病：伤寒病、流行性乙型脑炎、AIDS病等。（2）检测自身抗体——诊断自身免疫病：SLE、类风湿性关

2、节炎等2、利用已知抗体检测未知抗原（1）鉴定病原菌：诊断疾病（2）检测肿瘤相关抗原：检测甲胎蛋白以诊断肝癌（3）检测血型抗原、HLA抗原：鉴定血型，亲子鉴定（4）检测药物半抗原：确认运动员是否服用兴奋剂（二）抗原或抗体的检测方法凝集反应沉淀反应补体参与的抗原抗体反应免疫标记技术（一）凝集反应（agglutination）颗粒性抗原（红细胞、细菌、乳胶颗粒等）与抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。1、直接凝集(directagglutination)玻片凝集、试管凝集2、间接凝集（indirectagglutination）可溶性抗原

3、包被在乳胶颗粒或红细胞表面，与相应抗体混合出现的凝集现象。3、抗球蛋白试验（Coombs试验）抗原与单价抗体（不完全抗体）结合不出现凝集块，再加入抗球蛋白后即形成凝集块。用于检测抗Rh抗体以诊断新生儿溶血性贫血。乳胶颗粒红细胞类风湿因子检测妊娠试验间接凝集直接凝集（二）沉淀反应（precipitation）可溶性抗原（免疫球蛋白、细胞裂解物、组织浸液等）与相应抗体结合，形成不溶性免疫复合物，出现不透明的沉淀物。多在半固体琼脂凝胶上进行，形成白色的沉淀。可分为单向免疫扩散试验、双向免疫扩散试验、免疫电泳、免疫比浊法等。免疫比浊法：快速简

4、便。用于血清IgG、IgA、IgM、补体C3、C4含量测定（三）补体参与的抗原抗体反应1、50%补体溶血试验（CH50测定）——血清总补体量测定2、补体结合试验(complementfixationtest)：检测抗原或抗体。原理：用已知的指示系统检测试验系统是否结合补体进行诊断试验原理？检测系统：待测样品和已知抗原（或抗体）指示系统：SRBC和溶血素溶血—阴性；不溶血—阳性补体用标记物标记抗体或抗原进行抗原抗体反应借以提高免疫学诊断的敏感性荧光素：异硫氰酸荧光素（黄绿色荧光）、藻红蛋白、罗丹明（红色荧光）放射性同位素：125I、13

5、1I酶：辣根过氧化物酶、硷性磷酸酶免疫荧光检测法（IFA）放射免疫检测法（RIA）酶免疫检测法（EIA）（四）免疫标记技术液相（ELISA）、固相（免疫组化技术）直接荧光法间接荧光法免疫荧光技术间接法双抗夹心法竞争法E:辣根过氧化酶HRPS:底物二氨基联苯胺DAB/邻苯胺酶联免疫吸附试验（enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA法）间接法DAB双抗夹心法DABBAS-ELISA法（biotin-avidin-system，生物素-抗生物素系统-ELISA法）：敏感性更高。用于抗原抗体以及DNA、RNA的

6、检测。卵白及某些微生物中的蛋白质灵敏度达pg水平。常用于微量物质测定，如胰岛素、生长激素、甲状腺素、孕酮等激素、吗啡、地高辛等药物以及IgE等。放射免疫检测法（RIA）竞争法能分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子量，常用于检测多种病毒的抗体或抗原，如抗HIV抗体的检测。免疫印迹法二、淋巴细胞的测定（一）淋巴细胞的分离与类型鉴定1、淋巴细胞的分离：外周血葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法白膜层单核细胞淋巴细胞BT吸附分离过尼龙毛柱分离（1）间接免疫荧光法：鉴定细胞的群、亚群。用CD3、CD4、CD8单克隆抗体检测患者外周血T细胞表面相应抗原

7、CD3+——T细胞，计算T细胞总数。CD4+——CD4+T细胞，计算CD4+T细胞数。CD8+——CD8+T细胞，计算CD8+亚群T细胞数计算CD4+/CD8+比例正常人PMB中T细胞占65~75%CD4+/CD8+约为1.5~22、淋巴细胞的类型鉴定：淋巴细胞表面标记检测、记数用mIgM、mIgD单克隆抗体检测患者外周血B细胞表面相应的抗原已检测B细胞的数量正常人外周血中SmIg+细胞占8~12%（2）流式细胞术（flowcytometry）（二）淋巴细胞功能测定1、T细胞功能测定（1）T细胞增殖试验（淋转）：丝裂原、抗CD3单克隆

8、抗体等能非特异地激活T细胞，使之发生转化增殖，计算淋巴母细胞转化率（正常值65~80%）。①形态学观察法②3H-TdR渗入法：用液体闪烁仪测定样品的β射线放射活性③MTT法（2）淋巴细胞介导的细胞毒试验（LMC）——检测