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1、氧化应激的定量评价方法大致分做三类：1）测定由活性氧修饰的化合物；2）测定活性氧消除系统酶和抗氧化物质的量；3）测定含有转录因子的氧化应激指示物。而根据氧化应激的物质种类，又可主要分为蛋白质氧化损伤标志物检测、脂质过氧化标志物检测、核酸DNA/RNA损伤检测以及活性氧消除系统酶和抗氧化物质检测等。检测的方法也是多种多样，化学法、免疫染色、ELISA等等就本人经验，核酸DNA/RNA损伤，如8-OHDGELISA等方法是比较可靠的，但是通常损伤较重才可能检测出，而传统MDA等脂质过氧化标志物、各种氧化酶化学检测是比较简便的，但却稳定性很差。大家能否谈谈自己曾采用的相关方法
2、，并从敏感性、简便性等方面谈谈自己的方法ROS氧化损伤碱基后，碱基不稳定，自己掉下去，可以形成APsite(apurinic/apyrimidinicsiteorabasicsite)，或者损伤的碱基被碱基切除（baseexcisionrepair）机制切掉形成中间产物。APsite一般不直接引起细胞凋亡，但是当量太大而又处在S期DNA复制时，细胞在修复APsite时形成nick直接激活PARP，或者两条互补链上临近的APsite会导致双链断裂，这样激活ATM等，就会进一步传递信号触发细胞凋亡机制了。一般活性氧才会损伤DNA，过氧化氢不会氧化应激（OxidativeSt
3、ress，OS）是指体内氧化与抗氧化作用失衡，倾向于氧化，导致中性粒细胞炎性浸润，蛋白酶分泌增加，产生大量氧化中间产物。氧化应激是由自由基在体内产生的一种负面作用，并被认为是导致衰老和疾病的一个重要因素细胞氧化损伤后需证实细胞功能障碍可检测哪些指标啊?1.细胞存活率的测定在细胞氧化损伤过程中,每隔半小时吸取100μL细胞液置于96孔微量滴定板,存活细胞用MTT(噻唑兰,serva)染色法确定.MTT溶于pH7.2PBS(终浓度5g/L),过滤灭菌.每孔加入20μLMTT溶液,37℃孵育4h,每孔再加入100μL酸性异丙醇(100μL异丙醇中含0.04NHCl),混匀,静
4、置5min后,将96孔滴定板置于酶联免疫检测仪上,于波长570nm处测定每孔光吸收值OD,用不加MTT的细胞孔作本底对照,细胞存活率=([OD]t/[OD]u)×100%,此处[OD]t为经3种处理方式处理过的细胞光吸收值,[OD]u为未经任何处理的细胞的光吸收值.2.凋亡细胞DNA电泳分析以800g的速度离心收集处理过的细胞,弃上清后悬浮于40μL96%0.2M磷酸氢二钠于4%0.1M柠檬酸的PC缓冲液中(pH7.8)30min;1kg离心5min后将上清转移至0.5mLEppendorf管,真空浓缩20min;加入3μL0.25%NP-40溶液和3μLRNaseA(
5、1g/L)溶液,在37℃下孵育30min后,再加入3μL1g/L蛋白酶K,37℃下继续孵育30min,最后加入12μL电泳指示剂溶液(含0.25%溴酚兰,40%蔗糖).将样品小心加入含溴乙啶的0.8%琼脂糖凝胶点样孔中,在25V电压下电泳10h,于紫外透射仪上观察电泳结果并拍照保存氧化损伤是引起许多组织细胞凋亡的一个重要机制。在一些因素的诱导下，容易发生氧化应激反应。而氧化和抗氧化作用失衡所致氧化应激引起胰岛R细胞损伤是糖尿病发生、发展的一个重要机制。近年来许多实验研究表明，高糖环境、细胞因子、胰岛淀粉样多肤(LAPP)等可引起体内某些细胞发生氧化应激反应，细胞损伤。多
6、种代谢紊乱导致人体内环境的改变，氧自由基产生过多，而自身的抗氧化防御系统受损害，导致机体处于氧化应激状态。红细胞内所含有的超氧化物歧化酶(SOD)及谷光甘肤过氧化物酶(GSH一PX)是高效的自由基清除剂，能保护细胞膜免受氧自由基的损伤，体内SOD减少，可加重氧化应激。而自由基形成的增加导致脂质过氧化的加速使脂质过氧化物(LPO)产生增多。通过给予抗氧化剂VitE,VitC后氧化应激改善。自由基可以直接作用于核酸，引起基的修饰碱和DNA链的断裂。碱基的改变可导致在基因控制下进行的许多生物过程受到破坏；DNA链断裂可使核酸的完整性和构型受到破坏，最终引起细胞死亡。修饰过的D
7、NA，一方面具有抗原性，刺激机体产生抗体，导致机体自身免疫反应发生。另一方面，DNA携带有遗传信息，自由基作用于DNA导致遗传信息的改变，从而控制以DNA为模板的蛋白质的合成，参与机体代谢。由于生物体系的复杂多样性，DNA氧化损伤的研究主要集中在体外模型系统上。自由基引致DNA损伤主要表现为碱基释放、解聚、碱基受损、交联.种类型。在脂质体、红细胞膜、大鼠肝细胞核膜脂质过氧化对核DNA影响的研究中，发现脂质过氧化引起的DNA损伤以交联为主。利用原子力显微镜能够直接观察到交联DNA的生力显微镜能够直接观察到交联DNA的生成。脂质过氧化过程中会
