常见缓冲液的配制演示教学.doc

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1、附溶液配制方法：　　pH7.20.01mol/LPBS　　KH2PO4　　　　　　　　　　0.38g　　Na2HPO4　　　　　　　　　1.02g(或Na2HPO4·12H2O2.58g)　　NaCl　　　　　　　　　　　8.0g蒸馏水加至　　　　　　　　1000mL　　pH7.4PBS/T　　NaCl　　　　　　　　　　　8.0g　　KH2PO4　　　　　　　　　　0.2g　　Na2HPO4·12H2O(或Na2HPO4·7H2O)　　　　2.89g（或2.16g）　　KCl　　　　　　　　　　　0.2g　　吐温20　　　　　　　　　0.5mL蒸馏水加至　　　　　　　1000mL　　

2、pH9.6碳酸盐缓冲液　　Na2CO3　　　　　　　　　1.59g　　NaHCO3　　　　　　　　　2.93g　　蒸馏水加至　　　　　　　1000mL　　0.075mol/L氯化钾低渗液氯化钾0.559g，蒸馏水100ml甲醇冰醋酸（3:1）固定液甲醇3份 冰醋（乙）酸1份姬姆萨染液Giemsa原液1ml 1/15mol/L磷酸缓冲液（pH6.8或7.4）10ml2.3%柠檬酸钠溶液柠檬酸钠（NaCHO·2HO）2.3g 蒸馏水100ml明胶显影液明胶粉0.2g 三蒸水10ml 甲酸0.1ml1%醋酸冰醋（乙）酸1ml 蒸馏水99mlH"o"33342-若丹明123染液H"o"3334

3、2（Hoechst33342）0.25μg若丹明123（Rhodamine123）1.0μgPBS1mlDPH贮备液DPH（1.6-Dipnenyl-1,3,5hexatriene,4.65mg） 四氢呋喃10mlDPH工作液(2×10-6mol/L)DPH贮备液0.1ml PBS100mlFDA贮备液二醋酸脂荧光素(Fluoresceindiacetate,FDA)5.0mg 丙酮1mlFDA工作液FDA贮备液0.1ml PBS100mlM-缓冲液（pH7.2）咪唑50mmol/L3.404g 氯化钾50mmol/L3.7g 氯化镁（MgCl·6HO）0.5mol/L101.65mg

4、 EGTA(乙二醇双（a-氨基乙基）醚四乙酸)1mmol/L380.35mg EDTA(乙二胺四乙酸)0.1mmol/L29.22mg 疏基乙醇1mmol0.07ml 4mol/L甘油292ml 蒸馏水加至1000ml1%TritonX-100液TritonX-100（聚乙二醇辛基苯基醚）1ml M-缓冲液99ml3%戊二醛液戊二醛25%3ml PBS液（pH7.2）97ml0.2%考马斯亮蓝R250染液考马斯亮蓝R250（CoomassiebrilliantblueR250）0.2g甲醇46.5ml 冰醋（乙）酸7ml 蒸馏水46.5ml生理盐水(0.85%氯化钠)氯化钠8.5g 三

5、蒸水1000ml0.25mol/L蔗糖水溶液（含0.003mol/L氯华钙）蔗糖85.5g 无水氯华钙0.33g 蒸馏水1000ml0.17mol/L氯化铵液氯化铵4.574g 蒸馏水500ml0.17mol/L硝酸钠液硝酸钠7.224g蒸馏水500ml0.12mol/L硫酸钠液硫酸钠（NaSO·HO）19.333g 蒸馏水500ml0.12mol/L草酸铵液草酸铵（（NH）Co·HO）8.527g 蒸馏水500ml0.17mol/L醋酸铵液醋酸铵6.552g 蒸馏水500ml0.32mol/L葡萄糖液葡萄糖28.83g 蒸馏水500ml0.32mol/L甘油液甘油（CH(OH)·1.

6、26g/ml)11.7ml 蒸馏水500ml0.32mol/L乙醇液无水乙醇9.33ml 蒸馏水500ml0.32mol/L丙醇液正丙醇（比重0.803）11.976ml 蒸馏水500ml化学名：2-[4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazinyl]ethanesulfonicacid中文名：羟乙基哌嗪乙硫磺酸分子式：C8H18N2O4SHEPES是一种非离子两性缓冲液,其在pH7.2-7.4范围内具有较好的缓冲能力。其最大优点是在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的PH值.在这种培养条件下,细胞培养瓶的盖子应拧紧,以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中.大多数培养

7、液中含有酚红作为pH指示剂,酸性培养液呈橙黄色,碱性培养液呈深红色.HEPES有些昂贵,在高浓度时对一些细胞可能有毒.原则上,HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制.实际操作中并非如此简单.溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长也是很重要的。HEPES使用方法有两种：(1)HEPES可按所需的浓度直接加入到配制的培养液中,再过滤除菌.每1000ml培养液中加入2.38克HEPES,待溶后用lNNaOH调pH