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时间:2020-09-20
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1、发酵液的预处理和固液分离方法目的不仅在于分离细胞、菌体和其它悬浮颗粒(细胞碎片、核酸和蛋白质的沉淀物),还希望除去部分可溶性杂质和改变滤液的性质,以利于后继各步操作。采用絮凝或凝聚的方法,设法增大悬浮液中固体粒子的大小,提高其沉降速度;或采用稀释、加热等方法降低黏度,以利于过滤。第一节发酵液的预处理一、发酵液过滤特性的改变微生物发酵液的特性为:发酵产物浓度较低,大多为1-10%,悬浮液中大部分是水;悬浮物颗粒小,相对密度与液相相差不大;固体粒子可压缩性大;液相粘度大,大多为非牛顿型流体;性质不稳定,随时间变化,如易受空气氧化、微生物污染、蛋白
2、酶水解等作用的影响。微生物发酵液的成分极为复杂,其中除了所培养的微生物菌体及残存的固体培养基外,还有未被微生物完全利用的糖类、无机盐、蛋白质,以及微生物的各种代谢产物。改善发酵液过滤特性的物理化学方法:调酸(等电点)、热处理、电解质处理、添加凝聚剂、添加表面活性物质、添加反应剂、冷冻-解冻及添加助滤剂等。1.降低液体粘度2.调整pH3.凝聚与絮凝根据流体力学原理,滤液通过滤饼的速率与液体的粘度成反比,降低液体粘度(加水稀释法和加热法等)可有效提高过滤速率。注意加热温度与时间,不影响产物活性和细胞的完整性。pH值直接影响发酵液中某些物质的电离度
3、和电荷性质,适当调节pH值可改善其过滤特性。氨基酸、蛋白质等电点的调节;在膜过滤中,发酵液中的大分子物质易与膜发生吸附,通过调整pH值改变易吸附分子的电荷性质,即可减少堵塞和污染;细胞、细胞碎片及某些胶体物质等在某个pH值下也可能趋于絮凝而成为较大颗粒,有利于过滤的进行。采用凝聚和絮凝技术能有效改变细胞、细胞碎片及溶解大分子物质的分散状态,使其聚结成较大的颗粒,便于提高过滤速率。另外,还能有效地除去杂蛋白和固体杂质,提高滤液质量。凝聚——指在电解质作用下,由于胶粒之间双电层电排斥作用降低,电位下降,而使胶体体系不稳定的现象;絮凝——指在某些高
4、分子絮凝剂存在下,基于桥架作用,使胶粒形成较大絮凝团的过程。(1)凝聚发酵液中的细胞、菌体或蛋白质等胶体粒子双电层的结构使胶粒之间不易聚集而保持稳定的分散状态。阳离子对带负电荷的胶粒凝聚能力的次序为:Al3+>Fe3+>H+>Ca2+>Mg2+>K+>Na+>Li+常用的凝聚剂电解质有:硫酸铝Al2(SO4)3•18H2O(明矾);氯化铝AlCl3•6H2O;三氯化铁FeCl3;硫酸亚铁FeSO4·7H2O;石灰;ZnSO4;MgCO3采用絮凝法可形成粗大的絮凝体,使发酵液较易分离。絮凝剂是一种能溶于水的高分子聚合物,其相对分子质量可高达数万
5、至一千万以上,长链状结构,其链节上含有许多活性官能团,包括带电荷的阴离子(如---COOH)或阳离子(如---NH2)基团以及不带电荷的非离子型基团。它们通过静电引力、范德华引力或氢键的作用,强烈地吸附在胶粒的表面。当一个高分子聚合物的许多链节分别吸附在不同的胶粒表面上,产生桥架联结时,就形成了较大的絮团,这就是絮凝作用。(2)絮凝絮凝机理示意图1)有机高分子聚合物,如聚丙烯酰胺类衍生物、聚苯乙烯类衍生物;2)无机高分子聚合物,如聚合铝盐、聚合铁盐等;3)天然有机高分子絮凝剂,如聚糖类胶粘物、海藻酸钠、明胶、骨胶、壳多糖、脱乙酰壳多糖等。目前
6、最常见的高分子聚合物絮凝剂有机合成的聚丙烯酰胺(polyacrylamide)类衍生物根据活性基团在水中解离情况不同,可分为三类:非离子型、阴离子型(含有羧基)阳离子型(含有胺基)工业上使用的絮凝剂可分为三类:聚丙烯酰胺类絮凝剂的优点用量少,一般以mg/L计量;絮凝体粗大,分离效果好;絮凝速度快;种类多,适用范围广。聚丙烯酰胺类絮凝剂的缺点存在一定的毒性,特别是阳离子型聚丙烯酰胺,用于食品和医药工业时应谨慎。聚丙烯酰胺类絮凝剂的应用医药和食品工业:聚丙烯酸类阴离子絮凝剂(无毒),聚苯乙烯类衍生物,无机高分子聚合物絮凝剂(聚合铝盐、聚合铁盐等)
7、,天然有机高分子絮凝剂(多聚糖类胶粘物、海藻酸钠、明胶、骨胶、壳多糖、脱乙酰壳多糖等)。对于带负电荷的菌体或蛋白质来说,采用阳离子型高分子絮凝剂同时具有降低胶粒双电层电位和产生吸附桥架的双重机理;对于非离子型和阴离子型高分子絮凝剂,要采用凝聚和絮凝双重机理才能提高过滤效果,这种包括凝聚和絮凝机理的过程,称为混凝。(3)混凝影响絮凝的因素很多,絮凝效果和发酵液的性状有关,如细胞浓度,表面电荷的种类和大小等,故对于不同特性的发酵液需要选择不同种类的絮凝剂。对于一定的发酵液,絮凝效果也与絮凝剂的加量,分子量和类型,溶液的PH,搅拌速度和时间有关。4
8、.加入助滤剂5.加入反应剂一种不可压缩的多孔微粒,它能使滤饼疏松,滤速增大。悬浮液中大量的细微胶体粒子被吸附到助滤剂的表面上,改变了滤饼结构,降低了过滤阻力。常用的
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