血球计数板的构造和使用方法简介.doc

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1、血球计数板的构造和使用方法简介人教版生物教材(稳态与环境)培养液中酵母菌种群数量的变化的实验中用到了血球计数板,学生对它感到十分陌生,现对其构造和使用方法作简要介绍：一．血球计数板的构造血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台。中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格（见图C）,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用。计数室通常有两种规格.一种是大方格内分为25个中方格（中方格之间用双线分开，见图D），每一中方格又分为

2、16个小方格；另一种是大方格内分为16个中方格,每一中方格又分为25个小方格，但是不管计数室是哪一种构造,它们都有一个共同的特点：即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成（见图D）。 血球计数板的构造 (A．俯视图B．侧视图C．放大后的网格D．放大后的计数室)计数室边长为1mm，面积为lmm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数室的高度为0.1mm，所以其体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。二．血球计数板的使用（以计数酵母菌为例）(1)视待测菌悬液浓度，加无菌水

3、适当稀释。样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可。(2)将血球计数板用擦镜纸擦净,在计数室上盖上一块盖玻片。(3)将稀释后的酵母菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数室，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数室上，不要使计数室两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数室深度的升高。然后加盖盖玻片（勿使气泡产生）。(4)静置片刻,待酵

4、母菌全部沉降到计数室低部，将血球计数板置载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数室后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。(5)计数时若计数室是由16个中方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个中方格（即100小方格）的菌数。如果是由25个中方格组成的计数室，除数上述四个中方格外，还需数中央l个中方格（即80个方小格）的菌数（见图D）。若菌体位于中方格线上,一般只计数中方格的上方和右方线上的酵母细胞（如下图用红圈标出），以减少误差。计数时应不时调节细准焦螺旋，才能观

5、察到不同深度的菌体。 (6)每个样品计数应重复3次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），取其平均值,求出每一个小格中细胞平均数，按下列公式计算出每ml菌悬液所含酵母菌细胞数量。16格×25格的血球计数板计算公式：酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×104×稀释倍数25格×16格的血球计数板计算公式：酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×104×稀释倍数(7)测数完毕，取下盖玻片，用清水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放

6、入盒内保存。附：为熟悉血球计数板的构造，便于清楚的观察方格网和计数室，可用棕色水彩笔对其染色，线条染色后呈不透明状，非常容易辨认。用棕色水彩笔涂布时，用力要轻，以免磨损平台上的线条，涂布后放置2-3分钟，再用擦镜纸轻轻擦去表面上的染料颜色，并反复擦几次，此时只有方格网上的线条被染成棕色，便于观察。