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时间:2020-09-06
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1、荧光定量PCR中TaqMan荧光探针的原理及SYBR荧光染料的作用。2011-05-1708:41什么是TaqMan荧光探针和SYBR荧光染料?荧光定量PCR中TaqMan荧光探针的原理及SYBR荧光染料的作用。 TaqMan荧光探针:PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到
2、荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。再通过实时监测整个PCR进程荧光信号的积累,与标准曲线对比进行定量分析。 SYBR荧光染料:在传统PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料能特异性地掺入DNA双链,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,这样就保证了荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。当PCR循环复制时DNA双链也成倍增长,同样SYBR染料的荧光的信号也随之增倍,通过实时监测整个PCR进程中荧光信号的积累,
3、与标准曲线对比进行定量分析。
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