高分辨率溶解曲线.doc

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1、高分辨率熔解曲线高分辨率熔解（High-resolutionmelting，简称HRM）分析的主要原理是由于DNA序列的片段长短，GC含量、分布以及碱基互补性差异等的不同，在DNA分子热变性时会使溶解曲线的形状和位置有所不同。同许多荧光PCR技术一样，HRM利用特定的染料可以插入DNA双链中的特性，通过实时监测温度变化过程中双链DNA荧光染料与PCR扩增产物的结合情况记录高分辨率熔解曲线，从而对样品进行检测,可以迅速的检测出核酸片段中 GC 含量和单碱基的突变。高精度PCR仪及饱和性染料（LCGreen、EvaGreen等）的

2、出现使HRM得到广泛的普及和应用。项目：已知SNP位点检测；外显子突变位点筛查；物种鉴定、品种鉴定；甲基化研究；法医学鉴定、亲子鉴定。样本要求：新鲜或异硫氰酸胍保存的细胞(﹥5×106)、组织(﹥50mg)、血液(﹥300μl)等样本原材料，或纯化好的DNA(OD260/OD280在1.7-1.9之间)、总RNA(OD260/OD280在1.9-2.1之间，完整性好)，或反转录好的cDNA不少于30μl(纯度在1.9-2.1之间，及反转录好的cRNA完整性好)。技术优势：高通量：1次可同时检测多个样本。高敏度：HRM检测灵敏度

3、达1%-0.1%，是传统“PCR+测序”方法25-250倍。特异性好：PCR产物无需后续处理，特异性强。重复性好：样品经PCR扩增后直接进行HRM，直接在同一个PCR管内进行分析，实现闭管操作，避免交叉污染。操作简便：只需设计PCR引物，进行PCR反应，无需序列特异性探针，无需测序，也不受突变碱基位点与类型的局限。成本低：相比传统的SNP/突变分析法和定量探针法，简化了操作步骤，缩短了实验时间，大大降低了使用成本。