T淋巴细胞亚群检测操作程序.doc

《T淋巴细胞亚群检测操作程序.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、一、目的：保证流式细胞仪检测外周血中T淋巴细胞亚群检验的工作质量，旨在保证正确的T淋巴细胞亚群检测标准操作程序和控制检测结果的精确度与准确度。二、修改程序：本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：质量主管、授权人（科主任），方可改动。三、适用范围：外周血中T淋巴细胞亚群的绝对计数检测。四、实验原理：人的T淋巴细胞根据其生物功能和细胞表面抗原的表达可分为二大类：辅助/诱导T细胞和抑制/细胞毒T细胞。辅助/诱导T淋巴细胞表达CD3和CD4；抑制/细胞毒T细胞表达C

2、D3和CD8。利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面抗原结合，再配多色荧光染料以及绝对计数管，即可以把T淋巴细胞区分为两种亚型，进面得到各亚群的绝对值。六、主要试剂：CD4-FITC／CD8-PE／CD3-APC／CD45-PC7(美国BCs公司；CAT:IM3548)，七、实验操作：1、标本采集：使用EDTA-K2抗凝真空采血管，抽取静脉血2ml。2、染色和固定细胞：（1）标本管编号A，取一只流式专用管A1。（2）A1管加入CD4-FITC／CD8-PE／CD3-APC／CD45-PC720ul。（3）A

3、1管中再加入全血100ul，混均。（4）置室温，避光孵育15min。（5）加入FACSLysing溶血液2.0ml，置室温，避光孵育10min。（6）300g离心5min，弃上清液。（7）PBS洗涤细胞两次，300g离心5min，弃上清液。3、上机检测；分析结果；打印实验报告。八、参考值：总T细胞（CD3+）：59.4-84.6辅助/诱导T细胞(CD3+CD4+):28.5-60.5抑制/细胞毒T细胞(CD3+CD8+):11.1-38.3Th/Ts:0.9-3.6九、临床意义：T淋巴细胞可以分为辅助

4、/诱导T细胞和抑制/细胞毒T细胞。测定CD4和CD8可用于化疗、自身免疫病的免疫监视。在造血干细胞移植患者中，CD4+细胞恢复晚于CD8+细胞，导致Th/Ts比例显著下降。HIV及某些病毒感染（EB病毒、SARS病毒等）患者Th/Ts比例也下降显著。十、质量控制：1、先用标准微球调整仪器，正确设置电压、补偿。2、健康人CD4+细胞加CD8+细胞总数应大约等于CD3总数；免疫病、淋巴瘤可能有较大差异。3、收集细胞太少（少于500个）、碎片污染太多（超过10%）、门中淋巴细胞不纯（小于90%）可能引起实验

5、结果不正确。4、建议使用逻辑设门方法（CD45-SSC设门与FSC-SSC设门）减少杂质的干干扰。授权人质量主管操作人员生效日期