血友病的实验室诊断-戴菁ppt课件.ppt

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1、血友病的实验室诊断上海交通大学医学院附属瑞金医院戴菁凝血因子活性测定原理血友病是最常见的遗传性出血性疾病，关节、肌肉及脏器自发性或轻微外伤后的出血是其主要的临床表现。实验室检测在血友病诊断中具有重要的作用，不仅可以确定血友病的类型，还可以进行血友病严重程度的分型及预后判断。凝血因子活性测定原理血友病A：凝血因子VIII质或量的缺乏血友病B：凝血因子IX质和量的缺乏两种因子均属于内源性凝血途径血友病的分型凝血因子活性测定原理筛选试验纠正试验确诊试验鉴别试验排除试验抗体检测实验室的诊断凝血因子活性测定原理内源性凝血系统的有关试验APTT或SCT在血友病时可异常。（1）APTT:参考值是

2、31～43秒（各实验室可根据实际情况建立本实验室的参考值），一般可检出FⅧ:C25%的患者。部分敏感度高的试剂可以检测出FVIII:C、FIX:C活性在40%～50%的亚临床型血友病患者（如ActinFS等）（2）SCT:参考值为15～32分钟。本试验可以检出FⅧ:C25%～45%的患者。部分基层单位可选用试管法CT及RT进行检测，检测范围分别为2%和4%，无需特殊仪器及试剂。筛选试验凝血因子活性测定原理操作繁琐，耗时费力，敏感性和特异性较差，结果可能存在假阴性。容易引起漏诊、误诊，不建议采用纠正试验凝血因子活性测定原理FⅧ（FⅨ）的促凝活性（FⅧ:C/FⅨ:C）及抗原含量（FⅧ

3、:Ag/FⅨ:Ag）测定。根据FⅧ:C（FⅨ:C）水平的高低，将血友病A(B)分为：重型（2%）中型（2～5%）轻型（5～25%）亚临床型（45%）确诊试验出血时间（BT）、血管性血友病因子（vWF:Ag）检测：可以作为血友病与血管性血友病（vWD）的鉴别试验，vWD时，BT延长，vWF：Ag降低。血浆凝血酶原时间（PT）检测可以初步鉴别血友病性出血与外源性凝血系统凝血因子缺乏所致的出血。血浆FⅫ、FⅪ、FⅩ、FⅤ、FⅡ活性和纤维蛋白原含量测定可以用来进一步确定FⅫ、FⅪ、FⅩ、FⅤ、FⅡ及纤维蛋白原缺乏鉴别试验常用复钙交叉试验或APTT交叉试验作为排除获得性血友病的筛选试验。

4、获得性血友病时，相应抗体的滴度增高。排除试验凝血因子活性测定原理基于APTT的凝血因子活性测定：内源性凝血因子，包括FⅧ:C,FⅨ:C,FⅪ:C,FⅫ:C,FⅩ:C基于PT的凝血因子活性测定：外源性凝血因子，包括FⅦ:C,FⅡ:C,FⅤ:C,FⅩ:C确诊试验FⅧ:C检测原理基于APTT测定待检血浆（FⅧ缺乏）乏FⅧ因子血浆（含有除FⅧ因子外的所有因子）（商品化试剂）+APTT检测方法1.样本、标准品和质控标本准备：用因子稀释液对样本进行稀释：标准品：1/10（100%）样本：1/10，1/20，1/40（非常重要）浓度极低时可采用1/5，1/10，1/20质控标本：根据要求准备乏因

5、子血浆，根据说明书进行复溶，置室温一定时间后备用将试剂和样本置于仪器中的相应位置，先进行标准曲线定标，后再进行样本检测结果分析标准曲线：在半对数表（因子活性取对数，APTT时间取直线）上做出标准曲线在半对数表上作样本的曲线（三个稀释度对应三点APTT值）结果分析平行曲线：读取标准曲线上相对应的因子活性不平行曲线：提示有抑制物存在，进行抑制物检测，包括因子抗体和狼疮抗凝物凝血因子活性检测FⅧ为例：Clottingtime(s)Test204060100510203050100......1/101/201/40StandardFactorⅧactivity(%)80RatioClot

6、timeActivity%1/199.0sec9.5%1/2103.0sec15.3%1/4106.0sec26.1%Mean17.0%SCr=-1.000Testr=-0.996+.....1020304050709012060708090100++STD自动化血凝仪检测FⅧ：C结果及其结果分析，如图显示，该样本为lupus阳性，FⅧ：C在正常范围,对于此类样本解决方法：1、发色底物法检测2、两步法3、高浓度的磷脂以中和LAC：LAC非敏感的APTT试剂Activity%sample注意事项确定乏因子血浆为真正的乏因子血浆1:51:101:201:401:801:160结果Bra

7、nd:TechnocloneLotNo:4875A00ExpiryDate:30/6/200949.354.96165.570.977.3不予使用，因该乏因子血浆中FVIII活性为4u/dLBlank77.383.884.8Blank=4u/dLBrand:PrecisionBiologicLotNo:D8-19ExpiryDate:04/201048.65459.765.771.878.6可用于重症血友病患者的检测Blank95.596.896.3Blank=<1u