心肌肥厚实验方案

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1、一、实验方法1L-甲状腺素致大鼠心肌肥厚模型取50只220-250gSD雄性大鼠，随机分为6组，每组10只。分别为：空白组、模型组、玄参高剂量组、玄参中剂量组、玄参低剂量组、卡托普利（阳性对照药）。制备大鼠心肌肥厚模型。除正常组外，各组连续7d腹腔注射L-甲状腺素0.25mg·kg-1·d-1，1次/天，制成心肌肥厚模型；正常组腹腔注射等量注射生理盐水。各给药组在给予L-甲状腺素后以玄参高、中、低液灌胃给药；正常组、模型组给予等量生理盐水灌胃。连续给药9天，于处理前禁食不禁水12h，取血和心肌进行

2、各项分析。2大鼠心肌质量指数的测定大鼠心肌肥厚指数的测定：取大鼠称体重(BW)后腹主动脉取血。快速打开胸腔取心脏，去除心房组织，分离左、右心室，生理盐水漂洗去血，用滤纸吸干表面水分，电子天平准确称取左心室重量和全心重量。计算左心室重量/体重(LVW/BW)、全心重量/体重(HW/BW)，分别记为左心室肥厚指数(LVWI)、全心肥厚指数(HWI)。3心肌组织AngⅡ含量的测定组织匀浆制备：各组大鼠取血后，取左心室心肌组织约300mg/份，在4℃的生理盐水中漂洗2次，除去血液，滤汁拭干。用分析天平称重

3、，迅速置于冰浴中的微型手动匀浆器中，加入重量为组织重量9倍的4℃生理盐水，碾磨约10min制成匀浆，以3000r/min离心15min，取上清液置-70℃冰箱保存，待测。取上清液200ul加生理盐水800ul制备成2%的心肌组织匀浆。按血管紧张素Ⅱ试剂盒说明书及考马斯亮蓝蛋白测试盒说明书进行操作，测定AngⅡ及蛋白浓度，结果以每毫克蛋白中的AngⅡ含量表示。4心肌组织SOD、MDA活性测定去上清液，配置成一定浓度的组织匀浆，严格按照试剂盒说明书，用分光光度法检测心肌超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛

4、(MDA)含量。同时进行蛋白测定，按考马斯亮蓝蛋白测试盒说明书操作。结果以每毫克蛋白中的SOD活性表示。5心房利钠肽ANP的含量测定血清ANP含量测定：用ELESA法测定，常规方法取血并分离血清，严格按照试剂盒说明操作。二、造模方法的依据甲状腺素可以素激活了循环和组织中的RAS，使血管紧张素Ⅱ的含量增加；增加肾上腺素能受体的表达；L-Thy诱导的心肌重构具有缺血缺氧性损伤的特点，心肌线粒体中SOD活性降低，MDA含量升高。（1）甲状腺素激活了循环和组织中的RAS，在体内和离体实验中均发现甲状腺素直

5、接刺激了肾素mRNA，加速了血管紧张素原的合成和分泌，血管紧张素
(AngⅡ)生成增加，同时AngⅡ受体数目上调。AngⅡ是肾素血管紧张素系统的主要效应激素，对心室重构起着核心的作用，局部的AngⅡ水平对重构起了决定性的作用，AngⅡ
能增加细胞DNA和RNA的含量及代谢转换，增加细胞内蛋白质合成，可使心肌细胞增生、肥大，促进心脏重构肥厚。它的促肥厚作用起始于它和特异受体(如AT1受体)的结合，再经受体后的信号转导通路而完成。（2）增加肾上腺素能受体的表达，甲状腺素对儿茶酚胺等激素的作用能产生重要

6、影响，当循环中存在大量甲状腺素时，可增加
肾上腺素能受体表达,，促进心肌受体数目上调及提高其对儿茶酚胺的敏感性。（3）氧化应激作用L-Thy诱导的心肌重构具有缺血缺氧性损伤的特点，实验发现，给予L-Thy后大鼠心肌线粒体中SOD活性降低，MDA含量升高且心肌线粒体中Na+，K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活力均显著升高。三、所测得的指标心脏指数：是一项病理学指标，是反映左心功能不全程度较为准确的指标，所以采用动物心室重构模型时，可用心脏指数来评价左心功能不全的严重程度。超氧化物歧化酶SOD、MD

7、A：SOD是心肌组织内重要的抗氧化物酶，MDA为脂质过氧化反应的主要终产物，测定其含量可间接反应机体中自由基水平及脂质过氧化反应程度。心房利钠肽ANP：是由心房肌细胞合成和释放的一类多肽。它具有强烈的拍钠利尿的作用，并使血管平滑肌舒张，外周阻力降低，使心率减慢，心输出量减少，血压降低。此外，它还有抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统的作用，间接的促进Na+的排泄，以及抑制血管升压素的作用。当血容量增加和血压升高时，心房肌细胞释放心房钠尿肽，引起利尿和拍钠效应。因此，它是体内调节水盐平衡的一种重要的体液

8、因素。心肌肥厚、急性心力衰竭、慢性心力衰竭、急性心肌梗死、心肌重塑、左心功能障碍和急性冠状动脉综合征患ANP和BNP水平显著升高，与美国纽约心脏病学会心功能分级和心脏猝死密切相关，是诊断心力衰竭和评估心力衰竭严重程度的生物指标。研究进一步证实，ANP和BNP是心肌肥厚的标志物心脏负荷可诱导组蛋白去乙酰化酶-4出核信号组蛋白去甲基和异染色质蛋白-1分解，促使胚胎基因ANP和BNP的再表达，导致病理性心肌肥厚和心力衰竭。血管紧张素AngⅡ：AngⅡ具有较强的致心肌纤维化的作用，它可以通