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1、2.4.4可溶性蛋白质含量的测定样品提取:称取鲜样0.25—0.5g，用5mL蒸馏水或缓冲液研磨成匀浆后，3000rpm离心10min，上清液备用。吸取样品提取液1.0mL（视蛋白质含量适当稀释），放入试管中（每个样品重复2次），加入5mL考马斯亮蓝试剂，摇匀，放置2min后在595nm下比色，测定吸光度，并通过标准曲线查的蛋白质的含量。结果计算：样品蛋白质的含量=CV1／1000V2W(mg／g)式中：C—查标准曲线值，μg；V1—提取液总体积，mL；W—样品鲜重，g；V2—测定时加样量，mL。2.4.5总膳食纤维含量的测定
2、分别称取葛根样品0.2g于烧杯中，将烧杯置冷水浴中，加入60%H2SO460mL，消化30min，然后将消化好的纤维素溶液转入100mL容量瓶，并用60%H2SO4定容至刻度，摇匀后用布氏漏斗过滤于另一烧杯中。 取上述滤液5mL放入100mL容量瓶中，在冷水浴上加蒸馏水稀释至刻度，摇匀。取稀释后的溶液2mL于具塞试管中，加入0.5mL2％蒽酮试剂，并沿管壁加5mL浓H2SO4，塞上塞子，摇匀，静置12min，然后在620nm波长下，求测吸光度。 根据测得的吸光度按标准曲线求得的回归方程求出纤维素的量，然后按下式计算样品纤维素
3、的含量： Y(%)＝X×10-6×a×100/W 式中：X－按回归方程计算出纤维素含量（μg）；W－样品重（g）；10-6－将μg换算成g的系数；a－样品稀释倍数；Y－样品中纤维素含量（％）。2.4.11块根SPS、SS、SSS和ADPGPPase活性的测定酶液提取：称取1.50g鲜块根，加入8mLHepes-NaOH缓冲液，冰浴研磨，转入离心管中，匀浆液在4℃10000rpm离心10min，上清液用来测定SS、SSS和ADPGPPase的活性。ADPGPPase活性测定：参照张振清（1985）、Douglas（1988）
4、和Thomas等的方法，50μL酶液＋A液（100μL5mMADPG+50μL50mMMgCl2+100μLHepes-NaOH缓冲液+50μL50mMDTT）→30oC保温10min→+100μL20mMPPi起始反应15min→沸水浴1min终止反应→冷却至30oC＋500μLB液（100μL6mMNADP+50μL1.5IU的PGM+50μL5IU/mL的G-6-PDH+缓冲液0.3mL），总体积950μL，30oC反应10min→340nm比色。SS测定：参照Douglas（1988）的方法，反应体系（100μL）含有下
5、列物质：50mMHepes-NaOH(pH7.5)，10mMUDPG，100mM蔗糖及酶提取液。反应体系在30℃保温30min，然后沸水浴1min，终止反应。利用3,5二硝基水杨酸法测定反应生成的果糖含量。SSS活性的测定：参照梁建生等（1994）的方法，350μL反应介质（含50mMHepes-NaOH缓冲液，1.6mMADPG，15mMDTT,支链淀粉1mg，30oC保温5min＋50μL酶液→30oC反应30min→100℃1min，冷却到30oC+200μL反应介质（内含50mMHepes-NaOH缓冲液，40mMPEP
6、，100mMMgCl2，200mMKCl，2IU/mLPK），混匀→30oC反应20min→100oC1min+400μL反应介质（内含10mMGlucose，20mMMgCl2.6H2O，2mMNADP，1.4IU/mLHexokinase，0.35IU/mLG-6-PDH，50mMHepes-NaOH缓冲液）混匀→30oC反应10min，冷却后340nm下比色。SPS活性测定：参考中国科学院上海植物生理研究所、上海市植物生理学会主编《现代植物生理学实验指南》（1999）,取1g预冷的叶片,去掉中脉，剪碎,加入4倍体积的缓冲液
7、A(100mmlnol/L、PH=7.0的Tris-HCI,10mmoL/LMgCl2，2mmoL/LEDTA，2mmoL/L琉基乙醇，2%乙二醇)，磨成匀浆倒入离心管,在12000r/min离心10min,取上清液进行酶活性测定。以上提取过程均在4℃下进行，在总体积0.5mL反应混合液中(含50mmoL/LPH=7.0Tris一HCl,10mmoL/LMgC12,3mmoL/LUDPG,10mmoL/LFru一6一P)，最后加入0.3mL的酶液,30oC水浴30min后,加入0.2mmoL/LNaOH,沸水浴10min,流水冷
8、却,加入0.8mL0.1%间苯二酚及2.8mL30%HCI,摇匀,80℃水浴10min,冷却后于480nm波长处比色。酶活力以蔗糖(mg)/[叶片鲜重(mg)•h]表示。ATP酶活性的测定参照陈季楚法[17]:30mmol/L的ATP钠盐溶液0.1mL、0.1m
