生物技术制药复习.docx

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1、1.生物技术：以生命科学为基础，利用生物体（或生物组织、细胞及其组分）的特性和功能，设计构建具有预期性状的新物种或新品系，并与工程相结合，利用这样的新物种（品系进行加工生产，为社会提供商品和服务的一个综合性技术体系。基因工程是生物技术的核心与关键，细胞工程是生物技术的基础，酶工程是生物技术的条件，发酵工程是生物技术获得最终产品的手段。2.生物技术药物：一般来说，采用DNA重组技术或者其他生物新技术研制的蛋白质或者核酸类药物，称为生物技术药物。3.生物技术制药的特征：1高技术2高投入3长周期4高风险5高收益4.逆转录法1、mRNA的纯化2、cDNA第一

2、链的合成3、cDNA第二链的合成4、cDNA克隆5、将重组体导入宿主细胞6、cDNA文库的鉴定7、目的cDNA克隆的分离和鉴定5.表达载体必须具备以下条件：1载体能独立地进行复制2应具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记，3应具有很强的启动子4应具有阻遏子5应具有很强的终止子6所产生的mRNA必须具有翻译的起始信号6.影响目的基因在大肠杆菌中表达的因1外源基因的剂量2外源基因的表达效率3表达产物的稳定性4细胞的代谢负荷5工程菌的培养条件7.分批培养：是指在一个密闭系统内投入有限数量的营养物质后，接入少量菌种进行培养，使菌种生长繁殖，在特定条件下完成一个生

3、长周期的微生物培养方法。一般为了获得高密度菌体，需要将溶氧控制和流加补料相结合，延长对数期；补料分批培养：间歇或连续补加培养基使菌体进一步生长；连续培养：菌体浓度达到一定程度后，开动进料和出料泵，以一定的稀释率不间断培养；透析培养：利用膜的半透性原理使培养物和培养基分离，以去除代谢产物产生的不利影响；固定化培养：将工程菌固定化后再进行连续培养。8.细胞破碎：物理破碎法：高压匀浆，高速珠磨，超声破碎，高压挤压；化学破碎法：渗透冲击，增溶法，脂溶法；生物破碎法：酶溶法9.离子交换层析是以离子交换剂为固定相，依据流动相中组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆

4、交换时结合力的大小差别进行分离的方法疏水层析是利用蛋白质表面疏水区域与固定相上疏水基团相互作用力的差异进行分离的方法。亲和层析是利用固定化配体与目的蛋白之间非常特异的生物亲和力进行吸附，这种吸附既是特异的，又是可逆的，改变条件可以使这种结合解除。凝胶过滤层析又称排阻层析，是以多孔性凝胶填料为固定相，按分子大小对各组分进行分离的层析方法：比孔径大的不能扩散入孔径内部，先流出；较小的分子深入孔径内部，洗脱时间长，最后流出；分子大小适中的流出时间中等。10.贴壁细胞：生长须有贴附的支持物表面，自身分泌或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长。悬浮细胞生长

5、不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长。如淋巴细胞，Namalwa细胞，细胞呈圆形。兼性贴壁细胞生长不严格依赖支持物，既可以贴附于支持物表面生长，也可以在培养基中呈悬浮状态良好的生长。11.动物细胞的生理特点1细胞分裂周期长2细胞生长需贴附于基质，并有接触抑制现象3正常二倍体细胞的生长寿命是有限的4对周围环境十分敏感5动物细胞对培养基的要求高6动物细胞对蛋白质的合成途径和修饰功能与细菌不同12.CHO-K1：从中国地鼠卵巢中分离的上皮样细胞。广泛使用的是缺乏二氢叶酸还原酶的营养缺陷型突变株CHO-dhfr-。培养时需加入脯氨酸。核型：2n=20～

6、22。培养基：DEME培养基+0.1mmol/L次黄嘌呤+0.1mmol/L胸苷+10%小牛血清。生产的重组药品有：组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)，红细胞生成素(EPO)，乙肝表面抗原疫苗，粒系细胞集落刺激因子G-CSF，凝血因子VIII等。WI-38：来源于女性高加索人正常胚肺组织的二倍体细胞系.该细胞是成纤维细胞，能产生胶原;培养基:BME（Eagle’sbasalmedium）加小牛血清，pH控制在7.2。细胞的倍增时间为24h，有限寿命为50代，最早被认为安全的传代细胞，上世纪60年代被广泛用于制备疫苗。13.培养成功必备条件：1所有与细胞

7、接触的设备、器材和溶液，都必须保持绝对无菌，避免细胞外微生物的污染2必须有足够的营养供应，绝对不可有有害的物质，避免即使是极微量的有害离子的掺入3保证有适量的氧气供应4需要随时清除细胞代谢中产生的有害产物5有良好的适于生存的外界环境6及时分种，保持合适的细胞密度14.天然培养基指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基，早期阶段使用较多，如血浆凝块、血清、淋巴液、胚胎浸液以及羊水、腹水等。缺点：成分复杂，制作过程复杂，组分不稳定，批间差异大，来源有限，不适于大量培养和生产的需要，逐渐为合成培养基所替代。合成培养基优点：成分明确，组分稳定，可大量生产

8、供应①氨基酸：是细胞合成蛋白质的原料。所有细胞都需要12种必需氨基酸，此外还需要谷氨酰胺。②维生素：主要是形