粪大肠菌群的测定步骤.doc

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1、粪大肠菌群的测定1、半个月前配好初、复发酵所需培养液2、采样时用500ml广口玻璃瓶分开采样，牛皮纸封口3、操作三倍乳糖蛋白胨培养液：蛋白胨30g牛肉浸膏9g乳糖15g氯化钠15g蒸馏水1000ml溴甲基紫乙醇溶液3ml（1）培养液初发酵单倍乳糖蛋白胨培养液：蛋白胨10g牛肉浸膏3g乳糖5g氯化钠5g蒸馏水1000ml调节PH为7.2—7.4（NaOH）6%溴甲基紫乙醇溶液1ml充分混匀后10ml（三倍是5ml）分装于试管中，盖紧塞于蒸气锅中灭菌20min（0.1—0.5kpa），冷却后于药品储存箱保存

2、。单月13个地表水（每个水样需10个单倍，5个三倍），2个创业（每个水样需15个单倍）。共190个（1900ml）单倍，65个三倍（325ml）。双月10个地表水，2个创业。共130个（1600ml）单倍，50个三倍（250ml）。创业的水一个月采两次水样复发酵EC培养液胰胨20g乳糖5g胆盐三号1.5g磷酸氢二钾4g磷酸二氢钾1.5g氯化钠5g蒸馏水1000ml充分混匀后10ml分装于试管中，盖紧塞于蒸气锅中灭菌20min（0.1—0.5kpa），冷却后于药品储存箱保存。（1）做样初发酵：地表水15根

3、管为一个水样。5根为一组。第一排为5ml三倍培养液，加10ml水样；第二排为10ml单倍培养液，加1ml水样；第三排为10ml单倍培养液，取1ml水样稀释至10ml后再从中取1ml至装有培养液的试管。（10、1、0.1的取样量）创业，每个水样15根单倍。同上逐级稀释，取样量为0.1、0.01、0.001ml。将初发酵管放入培养箱中培养，温度为37℃±0.5℃，时间为24h±2h。观察：产酸产气为阳性，即变色且有气泡产生，可轻击试管查气泡。复发酵：呈阳性的试管进行接种后，做复发酵。将阳性的试管中溶液接种（

4、接种环）到EC培养液中，放在45℃±0.5℃的水浴锅中培养24h±2h。水浴锅液面应高于管中液面。观察：产气（有气泡）则证实为阳性。记录阳性试管数，查表可得MPN值。结果表示单位为：个/L