金属硫蛋白Elisa试剂盒.doc

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1、说明书版本号:3-27CatNo.EIA06540f鱼金属硫蛋白Metallothionein(MT)ELISA试剂盒　　尊敬的客户，感谢你选用本公司的产品。本产品适用于体外定量检测鱼血清、血浆或细胞培养上清液、组织等中天然和重组的MT浓度。检测其他特殊样本请咨询本公司技术支持。试剂盒仅供科研使用。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂盒组分。如有疑问，请联系武汉新启迪生物科技有限公司。您将得到我们的全方位服务。本试剂盒采用双抗体夹心法，双抗体夹心原理，是基于要测试的抗原具有二价以上的特性，能识别包被抗体，同时能识别检

2、测抗体，具体过程如下：（1）将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体，洗涤除去未结合的抗体及杂质，并用无关蛋白封闭空余结合位点。（2）加受检标本使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。（3）加生物素标记抗体，使固相免疫复合物上的抗原与生物素标记抗体结合。彻底洗涤未结合的生物素标记抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。（4）加辣根过氧化物酶标记亲和素，使生物素标记抗体与辣根过氧化物酶标记的亲和素结合。彻底洗涤未结合的酶标

3、记物。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。（5）加入底物显色，即可计算标本浓度。（6）注：一个抗体分子上可以标记上若干个生物素分子，一个生物素分子可以结合一个辣根过氧化物酶标记的亲和素，从而带来了大量的辣根过氧化物酶结合到抗体上，比传统的直接辣根过氧化物酶标记抗体具有更高的敏感性和放大效应。【鱼MT酶联免疫试剂盒检测原理】本实验采用双抗体夹心ELISA法。所提供的ELISAKit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒（ELISA）。预先包被的抗体为抗鱼MT单克隆抗体。检测相抗体为多克隆抗体，经生物素

4、（biotin）标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。【鱼MT酶联免疫试剂盒检测原理示意图】第一步第二部第三步第四步【试剂盒组成】名称96Tests48Tests保存条件1．鱼MT抗体包被板条8×128×64/-20℃2．鱼MT标准品2支（冻干）1支（冻干）4/-20℃3．浓缩生物素化鱼MT抗

5、体1支1支4/-20℃4．浓缩酶结合物(ABC)1支1支4/-20℃5.酶结合物(ABC)稀释液1瓶1瓶4/-20℃6．抗体稀释液1瓶1瓶4/-20℃7．标准品稀释液1瓶1瓶4/-20℃8．样品稀释液　1瓶1瓶4/-20℃9．浓缩洗涤液1瓶（25×）1瓶（25×）4/-20℃10．显色剂A1瓶1瓶(避光)4/-20℃11．显色剂B1瓶1瓶4/-20℃12．终止液1瓶1瓶4/-20℃13．说明书1份1份室温【试验所需自备试验设备和器材】1.酶标仪(450nm检测波长滤光片，570nm或630nm校正波长滤光片)。2

6、.洗板机（可调注液量，保证每孔350μl洗液而不溢出）。3.超净工作台，生物安全柜，通风柜。4.高精度单道加液器（量程为0.5-10μl,2-20μl,20-200μl,200-1000μl).5.高精度多道加液器（8道或12道，量程为50-300μl).6.37℃恒温箱。7.低温离心机。8.电冰箱（4℃,-20℃,-86℃）.9.分析天平。10.剪刀，镊子，钳子等。11.漩涡混合仪，低频振荡器等。【试验所需自备试验耗材及试剂】1.离心管（容量为1.5ml，5ml等）。2.一次性吸头（量程为0.5-10μl,2-

7、20μl,20-200μl,200-1000μl）.3.纯净水或蒸馏水。4.坐标纸。5.吸水纸。6.EDTA，枸橼酸钠，肝素【标本收集注意事项】1.收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。2.血清和血浆避免使用溶血，高血脂标本。3.标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。4.标本收集后若不及时检测，需按一次使用量分装，冻存于-20℃，-80℃电冰箱内，避免反复冻融。5.可根据标本的实际情况，做适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数)。6.收集标本，尽量做到双份的用量，避免一次实验失败，重复实验时标本缺失，从

8、而耽误实验进程。7.收集标本时，应该做好防护措施（比如戴手套，口罩，护目镜等），认为所有标本都具有一定的潜在危险性。8.样本处理应该在生物安全柜里面，并且正确使用生物安全柜。【标本处理办法】1.血清：将采集的全血静置冰箱4℃过夜，然后1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存。2.血浆：用EDT