实验七小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的观察ppt课件.ppt

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1、实验七、小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的观察一、实验目的：1、通过对小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活动的观察，加深理解细胞吞噬作用的过程及其意义。2、掌握小白鼠腹腔注射给药和颈椎脱臼处死方法。二、实验原理巨噬细胞起源于骨髓，经血液进入组织中而成，分布于全身各处。当机体受到某些损伤因素时（如微生物或其它病原体或异物侵入），能招引巨噬细胞，同时巨噬细胞有趋化性，主动向病原体或异物游走，在接触到病原体或异物时，细胞膜凹陷伸出伪足包围异物，并发生胞吞作用形成吞噬泡，继而巨噬细胞质中的溶酶体与吞噬泡融合，消化分

2、解异物。含台盼蓝的淀粉肉汤，可使腹腔中有较多的巨噬细胞，以供观察吞噬活动。三、实验用品1、仪器设备：显微镜、注射器、注射针头、吸管、试管架、剪刀、解剖刀、解剖镊、载玻片、盖玻片。2、试剂：①0.85%生理盐水②4%台盼蓝染液：称0.2g台盼蓝，再加入0.85%生理盐水50ml即可。③6%的淀粉肉汤（含台盼蓝染液）：将0.3g牛肉膏、1.0g蛋白胨、0.5g氯化钠放入100ml蒸馏水中，加热后加入可溶性淀粉6.0g，溶解后煮沸灭菌，置4℃冰箱保存。用时水浴融化，加入适量4%台盼蓝染液混匀，使其呈蓝色

3、。④Alsever溶液：称取2.05g葡萄糖、0.89g柠檬酸钠Na9C6H5O7.2H2O)、0.05g柠檬酸（C6H6O7.H2O）和0.42g氯化钠，用蒸馏水定容至100ml，调PH至7.2，过滤灭菌或高压灭菌10min，置4℃冰箱保存。四、实验材料：1、小白鼠2、1%鸡红细胞悬液1%鸡红细胞悬液制备：从集市买一只健康活鸡现杀取血5ml（防止污染），放入盛有20mlAlsever溶液瓶中，混匀后置4℃冰箱保存备用（2周内使用）。使用前，取用Alsever’s液保存的新鲜鸡血5ml，加入8ml

4、的0.85%的NaCl溶液，小心混匀，1500r/min离心5min，如此洗涤3次，最后配成1%的鸡红细胞悬液。五、实验步骤1、实验前一天，给小白鼠腹腔注射6％淀粉肉汤液(含台盼蓝)1毫升（连续注射三天效果较好）。2、实验时，每组取一只注射过淀粉肉汤的小白鼠，腹腔注射1%鸡红细胞悬液1ml，25分钟~30分钟后再向腹腔注射0.9%生理盐水1ml，并用手轻揉小鼠腹部，有利于悬液分散。3分钟后，用颈椎脱臼方法处死小鼠（一手捏着鼠头、颈连接处，一手捏住鼠尾，分别向两端用力牵拉，直到拉死为止），迅速剖开腹

5、腔，用不带针头的注射器贴腹腔背壁处直接抽取腹腔液，滴片，制备一张临时装片，盖上盖玻片。放置2分钟~3分钟后在显微镜下观察。六、实验结果在高倍镜下，可见到圆形或形状不规则的巨噬细胞，其胞质中含有数量不等的蓝色颗粒（为吞入的含台盼蓝的淀粉肉汤形成的吞噬泡），还可见少量淡黄色椭圆形有核的鸡红细胞。慢慢移动玻片标本，仔细观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程：有的鸡红细胞（一个至多个）紧贴于巨噬细胞表面；有的巨噬细胞已将一至数个鸡红细胞部分吞入；有的巨噬细胞已吞入了一个或几个红细胞，形成了椭圆形吞噬泡；有的巨噬细

6、胞内的吞噬泡已与溶酶体融合正在被消化，体积缩小呈圆形。将所见到的处在不同吞噬阶段的巨噬细胞动态地联系起来，想一想吞噬作用的全过程。七、注意事项：剖开小鼠腹腔时，剪刀头要向上，以避免剪破腹腔血管，腹腔液应是无色的液体。八、作业：在高倍镜下绘制小鼠巨噬细胞吞噬鸡血红细胞的过程图（绘制不同吞噬阶段的巨噬细胞图各一个），示巨噬细胞吞噬作用的全过程。单核细胞（上）和巨噬细胞（下）单核巨噬细胞吞噬过程示意图巨噬细胞正在吞噬衰老的红细胞巨噬细胞吞噬细菌（电镜）肺巨噬细胞吞噬大肠杆菌（电镜）