分光光度计使用注意事项剖析.doc

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1、分光光度计的使用一．使用及维护1.安装环境1.1温度要求：装在不受阳光直接曝晒的房间；最好装空调，使室温维持在（20±2℃）；仪器附近不应有高温的暖气管或其它电热器具；仪器后面板与墙之间应留一定空间。1.2湿度要求：水蒸气在（1350～1450）nm和（1800～1950）nm两个波长区域内有光吸收，会严重干扰测定。潮湿会导致分光器反射膜层斑剥、脱落等。故相对湿度最好保持在（40～75）％。高档紫外－可见－近红外分光光度计要用高纯氮气冲洗。干燥筒内的变色硅胶应及时更换。1.3防震、防尘、防腐和防电磁干扰：2.光源灯2.1拿灯时不要碰窗口，以免手上的

2、油污经紫外照射后，形成结痕难以去掉.倘若不小心而碰触，应及时用无水乙醇抹擦干净。2.2灯有寿命，要节约使用.但工作间歇时间短，不要关灯和停机.2.3在灯虽然能点亮，但不稳定或强度大大减弱而影响测量时，就应更换新灯.2.4应待灯冷却后，再重新启动.启动后预热15-30min才能读数.2.5不要用眼睛直视灯，因为紫外辐射会损伤人的眼睛。3.单色器3.1单色器是仪器的心脏部分.不要轻易装、拆，也不要去摸触镜面.3.2平时要保持内部干燥，及时更换干燥剂，以防止色散元件和反射镜受潮而发霉，测定挥发样品必须使用密封吸收池，以免样品蒸气进入单色器，腐蚀反射镜、透

3、镜及色散元件的镜面.3.3如果选定波长和狭缝宽度是用旋钮，则要按说明书规定的方向转动到欲测的位置，切勿来回转动，以防回衡误差.4.样品室4.1样品室是存放吸收池的地方，防止样品的交叉污染，决不可将样品留在样品室中过夜.4.2吸收池的光学面一定要维护好，不能用刷子刷.否则光学面发毛会增加散射而影响测定准确度.保护吸收池最重要的一条是使用后及时清洗，否则留下液痕，日后再洗，事倍功半.用完的吸收池可放在中性肥皂水中(将十二烷基硫酸钠用蒸馏水配制成透明的稀溶液)，或放在8mol／l盐酸加45％乙醇的等量混合液中浸泡，然后用自来水冲洗，再用蒸馏水洗净，放在无

4、灰尘的地方凉干备用.如果急于使用，可在真空中抽干.但不要用热吹风吹干。4.3对于盛过蛋白质和核酸的样品池最好不要用市售的烷基磺化型的清洗剂，因为它们有类似蛋白质的吸收光谱，清洗不慎会引入误差，所以此时最好使用非离子型清洗剂(如triton)浸泡.如果吸收池实在太脏，质量好的吸收池可放在洗液中稍加处理，但要随即取出冲洗，不宜浸泡过长的时间。洗液必须冲洗干净，因为它也有类似蛋白质和核酸的吸收光谱。4.4为了精确的定量测定，吸收池应事先进行校正.校正的办法是在池中加入欲测浓度的溶液，读出各吸收池的吸光度.以一个池为标准读出其他各池的吸光度.然后在读取样品

5、吸光度后，再予校正.市售常规光径(10mm)的吸收池一般匹配到0.Olmm.为了某种工作的需要(如差示光谱测定)必须寻找匹配池时，可在池中装入高吸收的样品，读数后加以挑选。一台仪器上的比色皿不得与其它仪器上的比色皿单个调换。比色皿每次用完后应立即用蒸馏水洗净，用软布或擦镜纸擦干，放于比色皿盒内。5.倾注溶液时要小心，不要弄湿外壁.如不慎弄湿，可用滤纸轻轻吸干后，再用绸布或擦镜纸擦净(最好用白绸，擦镜纸常有纸毛)。6.检测器：检测器室要保持干燥，以保证绝缘良好.在使用光电倍增管时，最重要的一点是通电后避免不必要的曝光。在仪器的光电倍增管的前面(通常在

6、样品室的上方)常有暗闸（微动开关)，这是光电倍增管的保护装置，用来保护其在开启样品室盖时，不受日光照射.否则通电后的光电倍增管，受强光照射，会造成永久性的损坏，或至少因“疲劳"而降低灵敏度。7.硫化铅光电池忌受紫外线照射，否则会降低其灵敏度。8.仪器用完后应用罩布盖好，以防落入灰尘。9.仪器应每半年左右或搬动后应检查波长精度等，以确保仪器性能正常。二．分光光度计的性能检查1．波长范围指分光光度计上限波长和下限波长之间的工作范围，在这个范围内的所有波长应具有足够的能量进行工作.这种检测波长极限是与光源、单色器及检测器的光谱响应特性有关的.如波长范围为

7、190-900nm的紫外-可见分光光度计必须具备氘灯和碘钨灯两个光源，而只有碘钨灯的分光光度计的工作范围，在短波侧不能低于340nm.有时在说明书规定的工作波长范围的两端由于缺乏足够的能量，不能正常工作.如在两端表现为100％T或A设定困难，或基线在两端不平直等，就需要检查可能发生的原因，如光源位置需要调整、光源需要更换、样品室窗口有溶液污染、光路需要调试、检测器疲劳等等。2．波长准确度波长准确度(有时被误称为波长精度)是指仪器波长指示器上所指示的波长值与仪器给出的实际波长值之间的符合程度，可用二者之差(即波长误差)来衡量其准确性.如某分光光度计的

8、波长准确度为±1.Onm，那么测定253.65nm汞灯辉线的最大能量应落在252.65nm和254.65nm之间.波长准确