用超滤技术分离和ppt课件.ppt

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1、实验名称：。。。。(黑体，3号字体)。。。。。。摘要（黑体，小4号）内容（宋体，5号）2.实验目的、原理（黑体，小4号）内容（宋体，5号）3.实验材料、方法（黑体，小4号）内容（宋体，5号）4.结果与讨论（黑体，小4号）内容（宋体，5号）5.思考题（黑体，小4号）内容（宋体，5号）*实验报告的行间距为1.5倍，用A4纸实验报告格式用超滤技术分离和浓缩碱性蛋白酶指导教师:刘叶青张秀萍万俊芬王伟2709碱性蛋白酶的理化性质由地衣芽孢杆菌经发酵培养获得，属胞外酶。分子量：2.7万左右等电点：pI8～9最适反应温度和pH：45～55℃和pH9

2、～12稳定性：30℃以下，pH7～12稳定。I、碱性蛋白酶的超滤性能研究一.实验原理1.水通量JW：纯水在一定条件（压力或流量、温度）下，单位时间，单位膜面积透过水的体积。式中：W透过膜的水量（ml）；t透水时间（min）；A膜的有效面积（m2）。式中：CF：最终截留液的浓度；VF：最终截留液的体积；Co：初始料液的浓度；Vo：初始料液的体积。2.截留率σ：超滤膜对某溶质的截留能力。3.浓差极化情况下，恒定压力ΔP，建立透出液体积V～超滤速度J的曲线图蛋白酶液恒流泵平板式超滤膜△P出背压阀超滤设备示意图：△P进透出液截留液小型超滤设备

3、图平板式超滤膜（50cm2）平板式超滤膜（0.1m2）平板式超滤膜盒膜材料膜型式截断分子量（MWCO）膜面积（A）聚醚砜板式膜50000.1M2再生纤维素板式膜50000.1M2超滤膜型式:操作方法（一）酶液配制粗酶粉100g搅匀40~50℃温水1000ml40℃水浴浸泡并搅拌30min冷冻高速离心9000rpm/min30min10℃上清液渣+40~50℃温水1000ml同上法处理上清液合并（二）膜的冲洗净水转速160左右△P出0.5bar背压阀△P进1.0bar膜的平均压力△P=(△P进+△P出)/2（三）超滤实验水通量JW的测定

4、步骤：纯净水超滤调节泵速及背压阀保持压力恒定量筒收集透出水ml同时用秒表记录时间t按公式（1）计算水通量Jw重复2~3次水通量JW的测定条件净水ml泵速进出口压力（bar）△P进△P出测透出液JWmlt（秒表）800160左右1.00.550记录ml0.1m2min2.透出液体积V~超滤速度J操作步骤酶液超滤调整压力保持恒定每隔一定透出液收集透出液ml记录时间t(S)计算J记录透出液累计体积V重复上述操作JV透出液体积V~超滤速度J操作条件:酶液：800ml泵速：160左右△P进≈1.0bar△P出≈0.6bar保持恒定透出液累计体积

5、Vml100150200250300350400450500550超滤速度透出液mlt（秒表）25252525252525252525??????????Jml/min3.截留率σ的测定步骤当透出液体积:V透=600ml停止超滤取样测定料液酶活C0截留液酶活CF透出液酶活C透计算σ截留液体积VF=V0–V透收集截留液（用泵全部打出）（四）膜的洗涤和冲洗通净水洗去残留酶液通0.1MNaOH液（40℃）洗涤约1小时无黄色洗出通去离子水（净水）洗去NaOH再次测水通量通0.05MNaOH液膜保存在该液中膜的洗涤和冲洗操作1.净水洗去酶液2.

6、0.1MNaOH液（40℃）洗1小时左右3.去离子水或净水，测水通量，（条件同实验前）4.0.05MNaOH洗，保存膜转速180左右△P出0.3bar背压阀△P进1.3~1.5barⅡ、Folin法测定蛋白酶活性实验原理标准曲线:Folin试剂在碱性下极不稳定，可被酚类化合物酪氨酸还原，呈蓝色反应，并服从比尔定律。酶活力定义:在实验条件下，每分钟水解酪蛋白产生1μg酪氨酸为一个酶活单位。蛋白酶样品测定：水解：蛋白酶酪蛋白（底物）含酚基的水解产物pH和T一定三氯乙酸过滤一定时间多余酪蛋白↓终止反应滤液显色：Na2CO3碱化滤液（含蛋白水

7、解产物）蓝色Folin试剂蓝色强度与蛋白水解产物的量成正比，在一定浓度范围内符合比尔定律，因此，可推测蛋白酶活性。二.操作方法(一)溶液配制0.4mol/LNa2CO3溶液：称Na2CO3固体42.4g，蒸馏水定溶至1L。0.2mol/LHCl溶液：量取浓HCl16.7ml，用蒸馏水稀释至1L。3.0.4mol/L三氯乙酸液：称三氯乙酸65.4g，蒸馏水定溶至1L。pH11的硼砂－氢氧化钠缓冲液：0.05mol/L硼砂溶液：称取19.07g硼砂，蒸馏水溶解并定容至1L；0.1mol/LNaOH溶液：称取4.0gNaOH，蒸馏水溶解并定

8、容至1L；将上述两液等体积混和即得。5.2％酪蛋白溶液：称酪蛋白5g，加0.1mol/LNaOH75ml和pH11的硼砂－氢氧化钠缓冲液100ml，沸水浴上加热促溶，然后用上述缓冲液定容到250ml，放入冰箱备用。（二）