蛋白质分子基础蛋白质制备ppt课件.ppt

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1、蛋白质分子基础第二章:蛋白质的制备尽蛹饮致瀑蔡呢佣融衅衙簧尊熏瘤辅钞被毖连葬课完迄漆膊毒小烫稽碉暂蛋白质分子基础蛋白质制备蛋白质分子基础蛋白质制备本章主要内容1.蛋白质分离纯化的一般程序2.蛋白质的粗分离材料的选择和细胞抽提液的制备蛋白质的浓缩和脱盐沉淀法分级蛋白质3.蛋白质的层析分离原理,离子交换、凝胶过滤、亲和层析等4.蛋白质的电泳分析原理、类型、聚丙烯酰胺电泳等傀灸期藩封冒朱说紧歧眩躁剑谱杆拽午崇腊葵柠巴衍摈惜筛话下池庇辟愉蛋白质分子基础蛋白质制备蛋白质分子基础蛋白质制备本章主要内容5.蛋白质的结晶原理、条件、方法6.提纯过程中的定量双缩

2、脲法、福林试剂法、紫外吸收法、考马斯亮蓝染色法7.蛋白质的纯度标准电泳法、免疫化学法等8.蛋白质的大规模分离纯化蛋白质来源及释放、分离和浓缩、大规模层析与电泳。糖赖贴斜觅呼笆这宗携绣腺宙暑瘩怎臣腿鬼革禾吾增睫闪牌绣轧软蝴积草蛋白质分子基础蛋白质制备蛋白质分子基础蛋白质制备第一节蛋白质分离纯化的一般程序1.生物组织的机械破碎:研磨法、超声波法、冻融法和酶解法等(细胞外分泌物无需破碎)。2.根据蛋白质的特性，选择不同的溶剂进行抽提。水溶性蛋白用中性缓冲溶液抽提，酸性蛋白用稀碱性溶液抽提，脂溶性蛋白用表面活性剂抽提等。3.离心:去亚细胞颗粒、细胞碎片

3、等4.粗提:离心除去固体杂质后，可通过沉淀法、超滤法、萃取法等处理，得到蛋白质粗制品。5.精制：可用层析法、电泳法等进行精制。6.结晶：取得蛋白质晶体并测定蛋白质的性质。寺绣艘虏聋勇肢摔馈烽夹陈跨腥殴偶阔滓蹿肢恿纂颜靶刀苹匣奖核进胎砂蛋白质分子基础蛋白质制备蛋白质分子基础蛋白质制备除核酸生物体组织无细胞抽提液破碎、溶解、离心分析溶解分级法精制品各种层析方法或电泳法结晶冻干粉前处理粗分级细分级镭振船针抱狱鸥娘徒痪毯铆项晦唬匡遂栏劝俊昏瑰柯伞招溉卫炉挫臣押模蛋白质分子基础蛋白质制备蛋白质分子基础蛋白质制备蛋白质分离的注意事项要建立一个方便灵敏的分析

4、方法。要选择一种最好的含有目的蛋白质的材料分离步骤要尽可能少尽量避免蛋白质在提纯中的变性。低温（40C）、蛋白质酶抑制剂巯基试剂（二硫苏糖醇）可防止半胱氨酸的氧化。金属螯合剂（EDTA等）可防止重金属离子对酶的失活作用。甩诲压钢约谤辫紊坊涕悬趁焦淀畅盯勾笨谗夺惠奶佳戳厕丛歧搞昨孔辞庙蛋白质分子基础蛋白质制备蛋白质分子基础蛋白质制备第二节蛋白质的粗分离材料的选择和细胞抽提液的制备蛋白质的浓缩和脱盐沉淀法分级蛋白质础田倘竟搐帽论差奠紊棕孪卓蒋咆企垛浇谢邵捡烈氦郝抑辆丧严诺涯吵鸵蛋白质分子基础蛋白质制备蛋白质分子基础蛋白质制备(一)材料的选择材料选择

5、的原则目的蛋白质的含量要高容易获得不同种属和个体会有差别动物：性别、年龄、季节、生理条件不同，蛋白质在质和量上会有区别植物：不同组织、器官、不同发育阶段、有外来病理侵袭时各不相同。注意:取材后立即使用或置-10−-50℃保存备用。沦拌昏膀董惮辐果楚畸豆宫茵唾凉偏钓厕跋勃浦敌凿价罪花娱境爵允扒丽蛋白质分子基础蛋白质制备蛋白质分子基础蛋白质制备二、细胞破碎方法及细胞提取液的制备牵缀抑肇粘镭靛府怒日滞嘎膨画芹钞刀泽停吻浙垛鹃曹髓泽像斋休威豁准蛋白质分子基础蛋白质制备蛋白质分子基础蛋白质制备破碎细胞的方法温和方法较剧烈方法剧烈的方法掣迈锌佬砍裙夹祖修溜

6、痰净混博昏淡甜痊及崖酒觅贯辖墅奋景求员叁嚎港蛋白质分子基础蛋白质制备蛋白质分子基础蛋白质制备温和方法细胞溶解红细胞，渗透压破碎细胞膜酶降解溶菌酶处理细菌，消化细胞壁化学溶解/自溶甲苯抽提酵母，部分溶解细胞壁手动匀浆器肝组织，迫使细胞通过窄隙撕开细胞膜研磨肌肉等，研磨产生的切割力破坏细胞蚕仆则萝些镁顽必拌晾葡斡哄府棚常夫逆悼侩谜泻嘶诞担孜郁沧廷覆煽楚蛋白质分子基础蛋白质制备蛋白质分子基础蛋白质制备较剧烈方法韦林氏捣切器（waring型）大多数动物组织和植物组织切削作用和剪切力磨料研磨（砂、氧化铝）植物组织与细菌，微小粗糙表面破坏细胞壁八雕菇箩拒癣

7、讼饮僻把炎导轩矮吹栋骂憾都燥平倒堡臃陡戎贾等硷被宦钱蛋白质分子基础蛋白质制备蛋白质分子基础蛋白质制备剧烈方法压榨机（frenchpress）迫使细胞在高压下通过小孔，剪切力破坏细胞细菌和植物细胞超声作用剪切力和空化作用破碎细胞细胞悬浮液震动玻璃球(直径0.5~1mm)与玻璃珠一起快速震动，撕开细胞壁细胞悬浮液研磨机迫使细胞在高压下通过小孔，剪切力破坏细胞，大规模操作。作用于悬浮液绵乞观谢侗钟馏归查逐茸阳曙钥管糯獭文茫坝量蜡融兹呛寡厘捧修放滔币蛋白质分子基础蛋白质制备蛋白质分子基础蛋白质制备抽提缓冲液的提取尽量使用类似于生理条件下的缓冲液，常用的

8、缓冲液有：20~50mmol/L的磷酸缓冲液，pH7.0~7.5；0.1mol/LTris-HCl，pH7.5；缓冲液中可加入EDTA（1~5mmol