行业标准：DB37T 4030-2020 苹果品种鉴定方法 微卫星方法.pdf

《行业标准：DB37T 4030-2020 苹果品种鉴定方法 微卫星方法.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、ICS07.080B30/39DB37山东省地方标准DB37/T4030—2020苹果品种鉴定方法微卫星方法Moleculeidentificationmethodforapplestrain2020-07-09发布2020-08-09实施山东省市场监督管理局发布DB37/T4030—2020前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由青岛海关提出、归口并组织实施。本标准起草单位：青岛海关技术中心、临沂大学、中国农业科学院果树研究所、中国科学院海洋研究所。本标准主要起草人：高宏伟、刘云国、陈新疆、王强、王鸿霞、陈盛盛、孙雯娴、孙敏、魏晓棠。本标准系首次发布

2、。IDB37/T4030—2020苹果品种鉴定方法微卫星方法1范围本标准规定了苹果品种的分子鉴定方法。本标准适用于由苹果的种苗、砧木、枝叶、果实等组织鉴定苹果品种。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T19557.1植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南总则NY/T2424—2013植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南苹果3术语和缩略语3.1术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1.1品种cultivar在一定的生态和经济

3、条件下，经自然或人工选择形成的动、植物群体。在植物学里，品种是在植物界的22个分类等级之下，具有相对的遗传稳定性和生物学及经济学上的一致性，并可以用普通的繁殖方法保持其恒久性。3.1.2PCR多聚酶链式反应polymerasechainreaction以拟扩增的DNA分子为模板，以末端互补的寡核苷酸片段为引物（primer），在耐热DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA分子合成。重复这一过程，即可使目的DNA片段得以大量扩增。是常规分子生物学技术之一，用于扩增特定的DNA片段。3.1.3基因座位（或位点）geneticlocus基因在染色

4、体上占有的特定位置叫基因位点。3.1.4微卫星序列microsatellite又称为短串联重复序列(shorttandemrepeats,STRs)或简单重复序列（simplesequencerepeats），是均匀分布于真核生物基因组中的简单重复序列，由2～6个核苷酸的串联重复片段构成，由于重复单位1DB37/T4030—2020的重复次数在个体间呈高度变异性并且数量丰富，因此微卫星标记的应用非常广泛。微卫星位点通常通过PCR扩增，扩增产物通过电泳分析并根据大小分离等位基因进行检测。3.1.5等位基因allele指位于一对同源染色体相同位置上控制同一性状不同形态的基因。3

5、.2缩略语下列缩略语适用于本文件。bp：碱基对（basepair）CTAB：十六烷基三甲基溴化铵（HexadecyltrimethylammoniumBromide）DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonuleicacid）EDTA：乙二胺四乙酸（EthyleneDiamineTetraaceticAcid）Tris：三羟甲基氨基甲烷（2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol）4原理不同苹果品种间SSR基因座位的等位基因存在序列长度多态性，即苹果品种间微卫星序列（SSR）依苹果品种不同，等位变异的数量可能不同。针对特定SSR两侧

6、序列高度保守的核酸序列，设计序列特异性引物，利用PCR技术对重复序列进行扩增，并对PCR扩增引物进行硝酸银染色或者荧光染料标记定量区分片段大小（bp），根据该等位变异的扩增片段大小鉴定苹果品种，在苹果品种鉴定的数据库中进行比对，从而鉴定苹果品种。5设备和材料5.1设备5.1.1天平：感量0.01g。5.1.2均质器。5.1.3水浴锅（0℃～100℃，感量0.1℃）。5.1.4振荡器。5.1.5研钵或其他粉碎装置。5.1.6高速台式冷冻离心机。5.1.7梯度PCR仪。5.1.8微量可调移液器及配套吸头（50μL、100μL、200μL）。5.1.9微量离心管（1.5mL和2m

7、L）。5.1.10毛细管电泳仪或者DNA分析仪。5.2试剂5.2.1CTAB提取缓冲液：55mmol/LCTAB，1400mmol/LNaCl，20mmol/LEDTA，100mmol/LTris，用10%盐酸调pH至8.0，121℃，高压灭菌20min，备用。5.2.2CTAB沉淀液：称取1.00gCTAB，0.50gNaCl，用适量水溶解后，调节pH=8.0，定容至200mL，高压灭菌。2DB37/T4030—20205.2.3RANaseRNA酶。5.2.4TE缓冲液（pH8.0）。5.2.5NaCl溶液，1