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时间:2020-10-21
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1、第7章吸光光度法Spectrophotometry7.1概述7.2光吸收的基本规律7.3紫外-可见分光光度计7.5光度分析法的误差7.4光度分析法的设计1光的基本性质光是一种电磁波,具有波粒二象性(真空速度2.9979×1010cm·s-1)。光子的能量(E)与光的频率(f)及波长(λ)关系如下:E=h=h(c/λ)根据波长或频率排列,得到如表所示的电磁波谱表。7.1概述2不同类型的光单色光(monochromaticlight):具同一波长的光。复合光(multiplexlight):由不同波长组成的光。紫外光(ultravioletlight):波长200~400nm。可见
2、光(visiblelight):人眼能感觉到的光,波长在400~750nm。它是由红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等各种色光按一定比例混合而成的。波段(waveband):各种色光的波长范围不同。互补色光(complementarycolorlight):按一定比例混合,得到白光(whitelight)。3物质的颜色与光的关系完全吸收完全透过吸收黄色光光谱示意表观现象示意复合光4物质的颜色是因物质对不同波长的光具有选择性吸收作用而产生的。5吸光光度法的定义(分光光度法)吸光光度法(Spectrophotometry)是基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法,包括比色法、可见及紫外
3、吸光光度法及红外光谱法等。重点讨论可见光区的吸光光度法6吸光光度法特点灵敏度高。常用于测定试样中质量分数为10-2~10-5的微量组分,甚至更低。准确度较高。吸光光度法为2%~5%。应用广泛。几乎所有的无机离子和许多有机化合物都可以直接或间接地用吸光光度法进行测定。仪器简单、操作简便、快速。7吸收光谱产生的原理吸收光谱包括:原子吸收光谱(Atomicabsorptionspectrum)分子吸收光谱(Molecularabsorptionspectrum)原子吸收光谱由原子外层电子选择性地吸收某些波长的电磁波而引起的,为线状光谱。8由电子能级跃迁而产生吸收光谱[能量差在1~20(
4、eV)],是紫外及可见光谱。吸收光谱产生的原理分子吸收光谱比较复杂,呈带状光谱,这是由于分子结构的复杂性所决定的。分子吸收光谱UV/VisSpectrophotometryInfraredSpectrophotometry由分子振动能级(能量差约0.05~leV)和转动能级(能量差小于0.05eV)的跃迁而产生的吸收光谱,为红外吸收光谱。用于分子结构的研究。9吸光度(absorbance)吸收光谱(吸收曲线,Absorptioncurve)以波长为横坐标,吸光度为纵坐标作图。λmax最大吸收波长(maximumabsorptionwavelengh):光吸收程度最大处的波长。紫色
5、KMnO4溶液对波长525nm附近绿色光的吸收最强,而对紫色和红色的吸收很弱。λmax=525nm。浓度不同,吸收光谱曲线形状相同,λmax不变,吸光度不同。例符合比尔定律的有色溶液稀释时,其最大吸收峰的波长位置吸光光度法中的吸收曲线,描述的关系是107.2光吸收的基本规律朗伯-比尔定律(Lambert-Beerlaw)透光度(透射比)T(Transmittance)吸光度A(Absorbance)11A=lg(I0/It)=lg(1/T)=Kbc当一束平行单色光通过均匀、非散射的透明吸光介质时,其吸光度与吸光质点的浓度和吸收层厚度的乘积成正比。朗伯(LambertJH)和比尔(
6、BeerA)分别于1760和1852年研究了光的吸收与溶液层的厚度及溶液浓度的定量关系,二者结合称为朗伯-比尔定律,也称为光的吸收定律。朗伯-比尔定律(Lambert-Beerlaw)12朗伯-比尔定律(Lambert-Beerlaw)朗伯-比尔定律是进行定量分析的理论基础。比例常数K与吸光物质的性质、入射光波长及温度等因素有关。含有多种吸光物质的溶液,由于各吸光物质对某一波长的单色光均有吸收作用,若各吸光物质的吸光质点之间相互不发生化学反应,当某一波长的单色光通过这样一种含有多种吸光物质的溶液时,溶液的总吸光度应等于各吸光物质的吸光度之和。这一规律称吸光度的加和性。13朗伯-比
7、尔定律的适用范围入射光为平行单色光且垂直照射吸光物质为均匀非散射体系吸光质点之间无相互作用辐射与物质之间的作用仅限于光吸收过程,无荧光和光化学现象发生在分光光度法中,设入射光的强度为1.0,透射光的强度为0.5,则吸光度为?用单色光通过某液层厚度一定的溶液,测得A=0.6,若将该溶液稀释一倍,其他条件不变,则稀释后该溶液的透过率?在紫外可见分光光度法中,若透过光强度为(I),入射光强度为(I0),则透光度为?例14吸光度A、透射比T与浓度c的关系15摩尔吸收系数(molarabs
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