怎样跑出好看的电泳图.doc

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1、双向电泳(Two-dimensionalelectrophoresis,2D)是研究蛋白质组学的一种经典方法，虽然目前在蛋白质组学研究中已经有很多更先进的方法，但是部分学者考虑到经费或者其他原因，双向电泳仍是首选！然而，在跑出来的电泳图往往不如自己所想的那么好，要不就不清晰，要不就拖尾等等现象，相信很多学者也遇到同样的问题。下面就这些问题笔者找到一些解决办法，希望能与广大学者共同学习研究，如有发现疑问或错误，请随时指出！怎样才能跑出条带清晰好看的电泳图？EB染色会比goldview染色清晰些！EB据说是目前为止染色效果最佳的。要跑好电泳图，注意这些方面：1、凝胶一定要加热

2、熔解完全，均匀，可以对着光亮的地方看看是否清澈；2、一般情况下，梳子越薄而长，条带越好看；3、上样量不宜过多，会造成条带的相互挤压；4、如果点样孔多余，尽量将样点到中间，尽量避免边缘效应，如果电泳槽够大，将胶放在中间一些，电场比较均匀；5、电泳电压一般在7-10V/CM之间；6、做胶的缓冲液和跑胶的缓冲液浓度应该一致；7、胶的浓度可能也会有一点点影响，一般用1.5%或者1.7%。8、加样时不要太快，让其自然沉底，均匀分布在电泳孔内。9、电泳开始时可以采用低电压使其跑出孔后，再调高电压。条带歪曲，可能的原因是上述第1条和第6条。拖尾，除了PCR的问题外，可能是以下的原因：1

3、、DNA降解；2、上样量过多；3、DNA变性；4、DNA样品含盐量太高；5、有一说是可能有蛋白质污染，不过这个问题想不太明白，有待验证。如何防止聚丙烯酰胺垂直电泳漏胶现象？1.固定玻璃板时，先将厚薄玻璃板在桌面对齐后在垂直面上稍微向厚板倾斜20度，使底面薄板略高于厚板。2.将固定好的玻板固定于放有海绵垫的制胶架上，固定时用手稍用力往下压，此时封闭的灌胶系统准备完毕。3.除了以上安装技巧外，由于海绵橡胶垫用久后会老化或者损坏，从而导致漏胶的现象时常发生，建议可以购买粘性高柔软性好的橡胶垫。