香菇多糖对烟草花叶病毒的抑制作用研究-论文.pdf

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1、现代农业科技2013年第24期植物保护学香菇多糖对烟草花叶病毒的抑制作用研究罗琰(济南大学医学与生命科学学院，山东济南250022)摘要利用有机溶剂浸提法分离香菇多糖，研究了多糖对烟草花叶病毒(TMV)的体外钝化以及对烟草抗性的诱导作用。结果表明：体外钝化与多糖浓度呈正相关，当处理浓度为5．00mg／mL时，枯斑抑制率为48％。用1．00mg／mL多糖喷施烟草叶片可以产生较好的诱导抗-}生，枯斑抑制率为53％。进一步研究表明，多糖诱导抗性与过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO)活性增加有关。关键词香菇多糖；烟草花叶病毒；抑制作用中图分类号$43

2、5．72；S481．9文献标识码A文章编号1007—5739(2013)24—0147—01烟草花叶病是农业生产中一类重要病害，对烟草花叶2结果与分析病的防治是植物病害防治研究的热点与难点。有报道指出2．1多糖对TM的钝化作用毛头鬼伞多糖『l1、平菇多糖嘲和云芝多糖【等多种真菌多糖对多糖稀释液对TMV均有钝化作用。如图1所示，多糖烟草花叶病毒(TMV)具有钝化和诱导抗性作用。香菇多糖处理后的TMV接种烟草叶片产生的枯斑量明显小于对照。是从香菇子实体中提取的水溶性多糖，目前该多糖的研究当多糖浓度为5．00mg／mL时，枯斑数目与对照之间表现出主要集中

3、在其抗肿瘤、抗病毒和免疫调节功能上。对其抗植极大差异，枯斑抑制率达48％。说明多糖对TMV具有钝化物病毒活性研究较少[4I。有研究显示香菇水浸液对TMV具作用，而且钝化作用随着浓度升高而升高。有抑制作用[51。本文以香菇多糖处理心叶烟(glutinosa)和60普通烟(N．tabacum)，研究其对TMV的抑制作用。50冰1材料与方法401．1试验材料TMV毒源由本实验室保存；测定枯斑寄主为心叶烟(』、7．萎30碳glutionosa)，系统侵染寄主为普通烟(tabacumvar．K326)。婪2O干香菇购于超市。101．2试验方法01．2．1香菇

4、多糖分离纯化[61。三氯乙酸浸提法提取粗糖：10g5．OU1．UUO．500．25香菇干粉，200mL三氯乙酸(0．2mol／L)，4oC过夜。滤液蒸发多糖终浓度∥mmL至100mL，加1×甲醇混匀，过夜。离心取上清，加2×甲醇，过图1香菇多糖对TMV的钝化作用夜，离心弃上清，干燥。多糖纯化：粗糖水溶液(w／V=50：1)加2．2多糖诱导处理对TMV抑制的影响IxCTAB缓冲液(0．15mol／L)，离心弃上清。乙酸(2mol／L)溶如图2所示，用O．25、0．50、1．00、5．00mg／mL多糖诱导解沉淀，离心取上清，加1×甲醇，过夜。离心，甲

5、醇漂洗沉淀，后，烟草均表现出TMV抗性，枯斑抑制率分别为23％、29％、冻干。53％和39％。其中稀释浓度为1．00mg／mL时，对TMV的抗性1．2．2多糖对TMV的钝化作用。多糖稀释液(0．25、0．50、诱导效果最好。1．00、5．00rag／mE)和等体积的TMV提取液混匀后，半叶法80接种到心叶烟上[21，3d后统计枯斑数。计算枯斑抑制率，计算公式如下：60枯斑抑制率(％)=矍器×l00替1．2．3多糖诱导烟草抗性。选取八至十叶期的烟草幼苗，喷毒40崔不同浓度多糖稀释液(0．25、0．50、1．00、5．00mg／mL)，对照组颦2O喷清

6、水。5、6和7位叶片表面喷处理液。4d后选择2、3和4位叶片进行TMV摩擦接种。接种6d后统计枯斑数量。计算0枯斑抑制率。5．O01．OOO．5OO．251．2．4酶活力测定。选择八至十叶期烟草幼苗，喷施1ms／mE多糖终浓度~／／mg／mL多糖稀释液，对照组为清水。诱导后第0、1、2、3、4、5、6,7天图2香菇多糖诱导对烟草TMV抑制率的影响取同一叶位叶片测定其POD和PPO活性。测定方法参考赵2．3多糖诱导对PoD和PPO活性的影响世杰等的方法。用1．O0m~／mL香菇多糖喷施烟草后，其叶片中POD和作者简介罗琰(1981一)，女，山东单县人

7、，讲师，博士研究生。研究方向PPO活性变化趋势基本一致，呈先上升再缓降的趋势。如图3资源微生物。收稿日期2013一ll—l1(下转第163页)】47董浩等：滁菊田草害综合治理对策探讨长，还能够有效阻挡阳光射入，削弱杂草的光合作用，使杂2．3．2茎叶处理。菊苗活棵杂草基本出齐后，对于前期未能草生长弱小，黑色地膜覆盖栽培还能提高地温、防旱、保湿、有效除草的田块，在草龄二至四叶期，结合田间杂草种类和防涝、防养分流失、增产增收。据调查，使用黑色地膜覆盖栽发生情况，及早选择除草剂开展茎叶除草。以禾本科杂草为培田块杂草植株和鲜重减少在85％以上。主的田块，可选

8、用10．8％高效氟吡甲禾灵乳油600mL／hm，2．2．2覆盖除草膜。菊田整平后，使用含都尔、丁草胺除草或15％精吡氟禾草