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1、福建农业学报28(12):1267~1272,2013Fu1ianJournalofAgriculturalSciences文章编号:1008—0384(2013)12—1267—06许泳清,李华伟,刘中华,等.甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)ELISA鉴定及RT-PCR检测方法的建立[J].福建农业学报,2013,28(12):1267—1272.XUY_Q,LIH—W,LIUZH,eta1.ELISAIdentificationandDevelopmentofRT—PCRDetectionofSweetPotatoFea
2、theryMottleVirus[J].FianJournalofAgriculturalSciences,2013,28(12):1267—1272.甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)ELISA鉴定及RT—PCR检测方法的建立许泳清,李华伟,刘中华,邱永祥,罗文彬,纪荣昌,汤浩,邱思鑫,余华(1.福建省农业科学院作物研究所,福建福州350013;2.福建省农业科学院中心实验室,福建福州350003)摘要:利用双抗体酶联免疫吸附测定法(DAS-ELISA)对采自福建省51份甘薯叶片进行检测,结果显示51份样品中有24份SPFM
3、V呈阳性,阳性率为47.O6,其中泉州样品SPFMV阳性率最高,为71.4O,其次为南安和龙岩的样品,阳性率均为5O。根据GenBank中公布的SPFMV外壳蛋白(cP)基因序列保守区域设计了1对特异性引物,通过RT—PCR反应程序的优化建立了能检测SPFMV的检测方法。该检测方法能够扩增出SPFMV特异性片段,片段大小为441bp,测序结果表明,SPFMV序列与参考序列的同源性92~97。关键词:甘薯;病毒;甘薯羽状斑驳病毒;EUsA;RT—PCR中图分类号:S435文献标识码:AELISAIdentificationa
4、ndDevelopmentofRT-pCRDetectionofSweetPotatoFeatheryMottleVirusXUYong—qing,LIHua—wei。LIUZhong—hua,QIUYong-xiang,LUOWen-bin,JIRong—chang,TANGHao,QIUSi-xin,YUHua(1.InstituteofCropSciences,FujianAcademyofAgriculturalSciences,Fuzhou,Fujian350013,China;2.CentralLaborato
5、ry。FujianAcademyofAgriculturalSciences,Fuzhou,Fujian350003,China)Abstract:51samplesofsweetpotatofromFujianprovinceweredetectedbythedoubleantibodyenzyme—linkedimmunosorbentmethod(DAS-ELISA).Theresultsshowedthat24sampleswereSPFMV-positive,thepositiveratewere47.06;th
6、ehighestpositiveratewas71.40,detectedinthesamplesfromQuanzhou,andthenextwere50.00,detectedinsamplesfromNananandLongyan.ApairofprimerwasdesignedandsynthesizedaccordingtothepublishednucleotidesequenceofcoatproteingeneofSPFMV,andaspecificRT—PCRdetectionprocedurewases
7、tablished.TheamplifiedSPFMV—specificfragmentinPCRcontained441bps,andshowed92一97%,homologywiththeSPFMVreferencesequence.Keywords:sweetpotato;virfls;sweetpotatofeatherymottlevirus;ELISA;RT—PCR目前已报道甘薯(Ipomoeabatatas)病毒有量的重要环节,在培育脱毒甘薯过程中,需要灵30多种r1],其中甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)敏、
8、高效、快速的病毒检测技术]。在世界甘薯种植区均有发生,严重影响甘薯的产量血清学方法是检测甘薯病毒最常用的方法,1和品质,造成的甘薯产量损失一般达20~30,次可检测大量样品,适于脱毒苗的检测。由于检测严重的可达5O以上_4]。甘薯是无性繁殖作物,耗费时间长,费用高,检测过程中常常出现假阳病毒主要通过薯块
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