甘薯羽状斑驳病毒（SPFMV）ELISA鉴定及RT-PCR检测方法的建立-论文.pdf

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1、福建农业学报28(12)：1267～1272，2013Fu1ianJournalofAgriculturalSciences文章编号：1008—0384(2013)12—1267—06许泳清，李华伟，刘中华，等．甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)ELISA鉴定及RT-PCR检测方法的建立[J]．福建农业学报，2013，28(12)：1267—1272．XUY_Q，LIH—W，LIUZH，eta1．ELISAIdentificationandDevelopmentofRT—PCRDetectionofSweetPotatoFea

2、theryMottleVirus[J]．FianJournalofAgriculturalSciences，2013，28(12)：1267—1272．甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)ELISA鉴定及RT—PCR检测方法的建立许泳清，李华伟，刘中华，邱永祥，罗文彬，纪荣昌，汤浩，邱思鑫，余华(1．福建省农业科学院作物研究所，福建福州350013；2．福建省农业科学院中心实验室，福建福州350003)摘要：利用双抗体酶联免疫吸附测定法(DAS-ELISA)对采自福建省51份甘薯叶片进行检测，结果显示51份样品中有24份SPFM

3、V呈阳性，阳性率为47．O6，其中泉州样品SPFMV阳性率最高，为71．4O，其次为南安和龙岩的样品，阳性率均为5O。根据GenBank中公布的SPFMV外壳蛋白(cP)基因序列保守区域设计了1对特异性引物，通过RT—PCR反应程序的优化建立了能检测SPFMV的检测方法。该检测方法能够扩增出SPFMV特异性片段，片段大小为441bp，测序结果表明，SPFMV序列与参考序列的同源性92～97。关键词：甘薯；病毒；甘薯羽状斑驳病毒；EUsA；RT—PCR中图分类号：S435文献标识码：AELISAIdentificationa

4、ndDevelopmentofRT-pCRDetectionofSweetPotatoFeatheryMottleVirusXUYong—qing，LIHua—wei。LIUZhong—hua，QIUYong-xiang，LUOWen-bin，JIRong—chang，TANGHao，QIUSi-xin，YUHua(1．InstituteofCropSciences，FujianAcademyofAgriculturalSciences，Fuzhou，Fujian350013，China；2．CentralLaborato

5、ry。FujianAcademyofAgriculturalSciences，Fuzhou，Fujian350003，China)Abstract：51samplesofsweetpotatofromFujianprovinceweredetectedbythedoubleantibodyenzyme—linkedimmunosorbentmethod(DAS-ELISA)．Theresultsshowedthat24sampleswereSPFMV-positive，thepositiveratewere47．06；th

6、ehighestpositiveratewas71．40，detectedinthesamplesfromQuanzhou，andthenextwere50．00，detectedinsamplesfromNananandLongyan．ApairofprimerwasdesignedandsynthesizedaccordingtothepublishednucleotidesequenceofcoatproteingeneofSPFMV，andaspecificRT—PCRdetectionprocedurewases

7、tablished．TheamplifiedSPFMV—specificfragmentinPCRcontained441bps，andshowed92一97％，homologywiththeSPFMVreferencesequence．Keywords：sweetpotato；virfls；sweetpotatofeatherymottlevirus；ELISA；RT—PCR目前已报道甘薯(Ipomoeabatatas)病毒有量的重要环节，在培育脱毒甘薯过程中，需要灵30多种r1]，其中甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)敏、

8、高效、快速的病毒检测技术]。在世界甘薯种植区均有发生，严重影响甘薯的产量血清学方法是检测甘薯病毒最常用的方法，1和品质，造成的甘薯产量损失一般达20～30，次可检测大量样品，适于脱毒苗的检测。由于检测严重的可达5O以上_4]。甘薯是无性繁殖作物，耗费时间长，费用高，检测过程中常常出现假阳病毒主要通过薯块