基因工程经典总结_txt

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1、基因工程经典总结_txt顺反子（cistron）：即结构基因，为决定一条多肽链合成的功能单位操纵子（operon）：指启动基因、操纵基因和一系列紧密连锁的结构基因的总称。转录的功能单位。1OD260=50ug/mldsDNA,or40ug/mlforssDNAorRNAwestern抗体测抗原southerndna探针测dnanortherndna探针测rna属名种名株名对盐浓度要求不同的酶，可采取下列方法：使用较贵的酶的盐浓度，加大便宜酶的用量，同时酶解低盐酶先切，然后补加盐，高盐酶再切一种酶先

2、切，然后更换缓冲液，另一种酶再切DNA连接酶活性1UDNA连接酶的酶活性：在最佳反应条件下15℃反应1小时，完全连接1mgl-DNA（HindIII片段）所需的酶量平头是分子间连接加大连接酶用量（10倍大于粘性末端的连接）加大平头末端底物的浓度，增加分子间碰撞机会加入10%PEG8000，促进大分子之间的有效作用加入单价阳离子（NaCl），最终浓度150-200mM影响restrictionenzyme活性因素DNA样品的纯度：DNA样品的甲基化程度：核酸内切酶的缓冲液性质（高浓度的酶、高浓度的甘

3、油、低离子强度、极端pH值等，）Klenow酶（失去5-3外切活性的dna聚合酶1）的基本用途：补平由核酸内切酶产生的5‘粘性末端DNA片段的同位素末端标记cDNA第二链的合成双脱氧末端终止法测定DNA序列T4-DNA聚合酶的特性5‘→3‘的DNA聚合酶活性和3‘→5‘的核酸外切酶活性在无dNTP时，可以从任何3‘-OH端外切在只有一种dNTP时，外切至互补核苷酸暴露时停止在四种dNTP均存在时，聚合活性占主导地位基本用途：切平由核酸内切酶产生的3’粘性末端反转录酶的基本特性：双向外切DNA-RN

4、A杂合链中的RNA链核酸酶单链核酸外切酶：核酸外切酶VII（ExoVII）不需要Mg2+3,5同时动手双链核酸外切酶：核酸外切酶III（ExoIII）特异性地从3‘端外切双链核酸外切酶：核酸外切酶（lExo）特异性地从5‘端外切单链核酸内切酶：S1核酸酶降解单链DNA的速度比降解双链DNA快75000倍Zn2+必需最适pH范围为4.0-4.3需要NaCl10-300mM降解单链DNA的速度比降解单链RNA快7倍内切有缺口或者缺刻的双链dnarna末端脱氧核苷酰转移酶（TdT）来自小牛胸腺不需要模板

5、的DNA聚合酶，随机掺入dNTPs给镁离子还挺乖，给Co离子就不乖，3‘疯长大肠杆菌遗传背景清楚载体受体系统完备生长迅速培养简单重组子稳定可产生多种内毒素酵母真核生物特征遗传背景清楚生长迅速培养简单外源基因表达系统完善遗传稳定内源蛋白产物种类多含量高接合型质粒亦称自我转移的质粒，这类质粒除含有自我复制基因外，还带有一套控制细菌配对和质粒接合转移的基因，如F质粒，部分R质粒和部分Col质粒。非接合型质粒亦称不能自我转移的质粒，此类质粒能够自我复制，但不含转移基因组，因此这类质粒不能从一个细胞自我转移

6、到另一个细胞。从基因工程的安全角度讲，非接合型质粒用作克隆载体更为合适。mob迁移由接合型质粒带领非接合型质粒转移bom位点转移时特异性切割的位置CsCl-EtBr密度梯度离心慢纯污染SDS碱裂解法NaOH+SDSKAc适中煮沸法快不纯质粒提取的影响因素遗传背景拷贝数生长环境培养基在没有选择压力的情况下，两种亲缘关系密切的不同质粒，不能在同一宿主细胞中稳定地共存，这一现象称为质粒的不亲和性pSC101严谨型低拷贝四环素pBR322双筛选pUC氨苄lacZα互补原理xGAL蓝白斑筛选蓝色阴性pGEM

7、氨苄lacZT7SP6表达PKKGST噬菌体入和m13载体10-23cosmid人造有入dna和cos序列和ori31-45真核穿梭载体yac100-1000真核病毒sv40vvbacrvad转化(transformation)一词，严格地说是指感受态的大肠杆菌细胞捕获和表达质粒载体DNA分子的生命过程，而转染一词(transfection)，则是专指感受态的大肠杆菌细胞捕获和表达噬菌体DNA分子的生命过程。把重组体dna分子导入真核生物物理直接注射微注射电穿孔化学磷酸钙共沉淀葡聚糖法转染脂质体法

8、转染生物质粒介导病毒介导转化不同品系之间dna遗传性状的改变转导细菌的dna片段通过噬菌体dna分子导入宿主细胞转染运用介导将dna分子转入细胞感染用病毒把dna分子转入细胞基因文库(genelibrary)则是指某一生物类型全部基因的集合。这种集合是以重组体形式出现。基因文库构建包括以下基本程序：①DNA提取及片段化，或是cDNA的合成。②载体的选择及制备。③DNA片段或cDNA与载体连接。④重组体转化宿主细胞。⑤转化细胞的筛选。当获得了含重组体的宿主细胞时，即完成了基因的克隆。