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《乳酸菌的生理生化特性(2)1.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、1材料和方法1.1样品来源四川成都菊乐酸奶（AD）,盈棚小米椒(B)，红原酸奶（CEF）1.2培养基1.2.1MRS培养基蛋白胨10.0g酵母膏5.0g牛肉膏10.0g葡萄糖20.0g柠檬酸二铵2.0g无水乙酸钠5.0gTween801.0mlMgSO4·7H2O0.2gMnSO4·H2O0.05g琼脂15g蒸馏水1000ml注：pH=6.2~6.4，115°C灭菌30min。1.2.2PY培养基蛋白胨10.0g酵母膏10.0g盐溶液40.0ml蒸馏水1000ml注：调pH至7.0～7.2，121
2、℃灭菌15min。盐溶液：无水CaCl20.2gMgSO4·7H2O0.48gK2HPO41.0gNaCl2.0gKH2PO41.0gNaHCO310.0g蒸馏水1000mL4℃备用。1.2.3PYG培养基蛋白胨10.0g酵母膏10.0g盐溶液40.0ml葡萄糖10.0g蒸馏水1000ml注：调pH至7.0～7.2，121℃灭菌15min。1.2.4明胶基础培养基蛋白胨1.0g牛肉膏1.0g明胶12.0g葡萄糖0.1g盐溶液4.0ml蒸馏水1000mL115℃高压灭菌30min。1.2.5产葡聚糖
3、试验培养基：胰蛋白胨10.0g酵母提取物5.0g柠檬酸三铵5.0g磷酸氢二钾5.0g葡萄糖50.0g琼脂15.0g115℃灭菌30min。1.2.6溶性淀粉培养基向PY基础培养基中加入0.5％的可溶性淀粉。1.2.7氨酸水解试验培养基蛋白胨5.0g肉浸膏5.0g葡萄糖0.5gL-精氨酸10.0g吡多醛5.0mg蒸馏水1000mL1.6g/100ml溴甲酚紫乙醇溶液0.625g甲酚红液2.5mlpH6．0～6．5，3ml／管分装，121℃灭菌15min。1.2.8石蕊牛奶培养基脱脂奶粉100g，25
4、g/L石蕊40ml蒸馏水1000ml115℃灭菌30min1.2.9柠檬酸盐斜面培养基柠檬酸钠3.0gNH4H2PO41.0gMgSO40.2gK2HPO41.0gNaCl5.0g琼脂15.0g蒸馏水1000ml调PH至7，加入1.6%溴麝香草酚蓝指示剂10ml，培养基呈绿色，分装试管，每管5ml，121℃30min。1.2.10含硝酸钾的营养肉汤加入2g硝酸钾入营养肉汤。1.3主要试剂与溶液(1)过氧化氢，溴甲酚紫，可溶性淀粉，卢戈氏碘液，甲基红酒精溶液，(2)脱脂奶粉，硝酸钾，凡士林，石蕊，(
5、3)溴甲酚紫指示剂：1.6g溴甲酚紫，蒸馏水100ml。卢哥氏碘液：碘1.0g，碘化钾2.0g，蒸馏水300ml。精氨酸液：L-精氨酸1.5g，lg/10ml蒸馏水的半胱氨酸溶液0.05ml，蒸馏水10ml，调pH7.0，灭菌后备用。奈氏试剂：A液(氢氧化钾20g，蒸馏水50m1)与B液(碘化钾5g，碘化汞10g，蒸馏水50m1)混合后过滤，贮存于暗色瓶内备用。BTB-MR试剂：BTB0.2g，MR0.1g，95％乙醇300ml，蒸馏水200ml。1.4试验器材载玻片，盖玻片，倒管，试管，培养皿，
6、比色盘。2试验方法2.1形态和培养特征观察采用牛肉膏蛋白胨培养基，将已纯化后的甘油菌种活化后于37℃下培养20～24h，并进行革兰氏染色及菌体形态和菌落特征的观察。染色方法参照微生物鉴定实验指导2.2生长条件试验(1)耐盐性试验(NaCl浓度:0.85、1.20和1.71)(mol/L);(2)耐酸碱试验(pH:4.3、5.7、6.8、8.4、8.6和8.7);分别将参试菌接种于以上处理的液体培养基中培养48h,记录生长状况。2.3生理生化试验⑴过氧化氢酶测定将实验菌接种于PGY培养基斜面上,37
7、℃培养20h—24h,取一环接种的培养物,涂于干净的载玻片上,然后在其上滴加3%－—15%的过氧化氢,有气泡则为阳性反应,无气泡为阴性反应。⑵葡萄糖产酸产气实验在PY基础培养基内加入30g葡萄糖和5%吐温-80,1.6g/100mL的溴甲酚紫1.4mL作指示剂,在培养基内放置一小倒管,分装试管置37℃培养24h,经培养后,指示剂变黄表示产酸,倒管内出现气泡,表示产气。⑶淀粉水解实验接种新鲜的菌种于含有0.5g可溶性淀粉的PY基础培养基中,取少许培养液于比色盘内,同时取未接种的培养液作对照,分别在其
8、中加入卢哥氏碘液.不显色表示淀粉水解,显蓝黑色或蓝紫色时,表示淀粉未水解或水解不完全。⑷明胶液化实验将实验菌接种于明胶基础培养基中,置37℃培养,以一支未接种的试管作为对照。将接种的和未接种的对照管置于冰箱或冷水中,等待对照管凝固后记录实验结果,反复观察对比多次。如对照管凝固时,接种管液化为阳性反应,凝固为阴性反应⑸甲基红（M.R）试验接种实验细菌于PYG培养基，于37℃培养2天后，于培养物中加入几滴甲基红酒精溶液，如呈红色，表示阳性。⑹乙酰甲基甲醇V-P实验接种新鲜的实验菌种于P
