VITEK全自动微生物检测系统原理及其应用电子教案.doc

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1、VITEK全自动微生物检测系统原理及其应用近年来，微生物的检测鉴定技术已逐步由手工检测走向仪器化和电脑化，并力求简便、快速、准确。由生物梅里埃公司出品的全自动微生物鉴定/药敏分析系统VITEK是目前世界上最先进、自动化程度最高的细菌鉴定仪器之一。近年来，微生物的检测鉴定技术已逐步由手工检测走向仪器化和电脑化，并力求简便、快速、准确。由生物梅里埃公司出品的全自动微生物鉴定/药敏分析系统VITEK是目前世界上最先进、自动化程度最高的细菌鉴定仪器之一。VITEK已被许多国家定为细菌最终鉴定设备，并获美国药品食品管理局（FDA）认可。该系统有高

2、度的特异性、敏感性和重复性，还具有操作简便、检测速度快的特点，绝大多数细菌的鉴定在2～18h内可得出结果。现将该系统的工作原理、主要结构、功能并结合我们使用后的一些体会介绍如下。1　工作原理VITEK对细菌的鉴定是以每种细菌的微量生化反应为基础，不同种类的VITEK试卡（检测卡）含有多种的生化反应孔，可达30种。将手工分离的待检菌的纯菌落制成符合一定浊度要求的菌悬液，经充填机将菌悬液注入试卡内，封口后放入读数器/恒温培养箱，根据试卡各生化反应孔中的生长变化情况，由读数器按光学扫描原理，定时测定各生化介质中指示剂的显色(或浊度反应，然后把

3、读出信息输入电脑储存并进行分析，再和预定的阈值进行比较，判定反应，再通过数值编码技术与数据库中反应文件进行比较，最后鉴定报告将在显示器上自动显示)并在打印机上自动打印。2　VITEK系统的结构组成2.1　检测卡　目前VITEK系统的检测卡有14种，微生物常用的有7种，即：革兰氏阳性菌鉴定卡（GPI）、革兰氏阴性菌卡（GNI+）、非发酵菌卡（NFC）、酵母菌卡（YBC）、厌氧菌卡（ANI）、芽胞杆菌卡（BAC）、奈瑟氏菌嗜血杆菌卡（NHI），以及药敏检测卡等。每张检测卡对应接种1份标本，检测卡为一次性消耗品。2.2　充填机　将待测菌的菌悬

4、液注入试卡内。2.3　读数器/恒温箱　可在培养过程中定时读出细菌在试卡内培养基中的生长变化值。2.4　电脑主机/显示器/键盘/打印机　用于储存和分析资料、系统的操作和结果分析鉴定，实验结果的自动显示报告和打印。2.5　电源稳压器和UPS　在外围断电的情况下提供电脑主机约10min持续电源。3　VITEK系统的功能3.1　可鉴定405种细菌　其中：GPI卡可鉴定凝固酶阳性和阴性的葡萄球菌、肠球菌、草绿色和β溶血链球菌、棒状杆菌属以及李斯特氏菌属和丹毒丝菌等51种；GNI+卡可鉴定肠杆菌科、弧菌科和非发酵菌等116种；NFC卡可鉴定不动杆菌

5、、气单胞菌、产碱杆菌、假单胞菌、弧菌等42种；YBC卡可鉴定假丝酵母（念珠菌）、隐球菌、地霉、丝孢酵母、红酵母等34种；ANI卡可鉴定放线菌、拟杆菌、梭杆菌、乳杆菌、真杆菌、梭菌、消化链球菌等94种；BAC卡可鉴定芽胞杆菌21种；NHI卡可鉴定奈瑟氏菌、嗜血杆菌、金氏菌、摩拉氏菌、布兰汉氏菌等47种。3.2　可对澄清液体中的微生物进行计数。3.3　检测细菌生长曲线。3.4　药敏试验　有70多种药物约50多种药物组合的药敏卡。4　实际应用讨论实验室自引进VITEK系统后，用已知的金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、李斯特氏菌、O157∶H7、沙

6、门氏菌、志贺氏菌、绿脓杆菌、副溶血弧菌共8株标准菌株进行检测，结果与已知的完全相符。而且鉴定沙门氏菌属只需4h，志贺氏菌属6h，缩短了肠道致病菌生化鉴定的时间，操作也简便。如1999年7月13日晚某市一大厦中心餐厅发生食物中毒，发病49人。将可疑菌株用VITEK仪器进行鉴定，仅用13h就得出鉴定结果,而常规鉴定则需24h。又如1999年6月从一胖听的进口烤鳗酱油中分离出可疑酵母菌株，VITEK系统的YBC卡鉴定为丛生丝孢酵母。而常规法鉴定酵母菌需配制各种培养基，一般实验室试剂多不齐全，且鉴定者要有相当的工作经验。然而在未知菌的鉴定中，V

7、ITEK系统有时会因种种因素不能顺利获得鉴定报告，或由一些特殊的报告信息代替了正常的鉴定结果。最常见的有“unidentifiedorganism”（不能鉴定的细菌）。产生这一报告的原因有：①待检细菌不是单一菌株；②试卡生化小孔有气泡严重干扰比色；③菌龄太老；④所配制的待检菌菌悬液浊度过高或过低；⑤待检菌不能均匀悬浮于0.45%～0.5%盐水中；⑥罕见生物新种或不典型菌株,数据库缺乏资料。在VITEK的最后鉴定报告上，有时也会出现一些限定信息，这些限定信息是与鉴定结果同时存在的，它阐述了合格鉴定的标准。最常见的有“goodconfide

8、ncemarginalseparation”（好的可信性但难于区分），即生化反应结果同时相似于数据库中两个菌，且产生可接受的绝对相似值，使两种菌间难于区分，需加一些试验方可确定其最后鉴定。例如：副溶血弧菌与