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1、·12·中国免疫学杂志2003年第19卷①结核杆菌pcHSP65真核表达载体的构建及其DNA免疫实验②③居 巍 刘君炎 庄玉辉 叶林柏(武汉大学医学院免疫学系,武汉430071) 中国图书分类号 R378191 文献标识码 A 文章编号 10002484X(2003)0120012205[摘 要] 目的:构建以结核分枝杆菌热休克蛋白65kD基因为基础的核酸疫苗。方法:采用聚合酶链反应从结核杆菌H37Rv株基因中,扩增出HSP65的编码基因,经限制性核酸内切酶消化后,插入真核表达载体pcDNA3.1(-)的相应酶切位点
2、,并将此重组质粒免疫动物。结果:重组质粒的插入基因经序列测定证实为结核分枝杆菌HSP65。DNA免疫小鼠体内产生特异性抗体,能抵抗结核杆菌的感染。结论:以HSP65编码基因为基础的真核表达载体构建成功,并能引起特异性动物免疫反应,为进一步研究其在结核病防治中的作用奠定了基础。[关键词]结核分枝杆菌;HSP65;真核表达载体ConstructionofeukaryoticexpressionvectorandDNAimmuneexperimentpcH2SP65ofmycobacteriumtuberculosisJUWei
3、,LIUJun2Yan,ZHUANYu2Huietal.DepartmentofImmunology,MedicalCollege,WuhanUniversity,Wuhan430071,China[Abstract]Objective:ToconstructnucleotidevaccinebasedonHSP65geneofmycobacteriumtuberculosis.Methods:Thegeneencod2ingheatshockprotein65kilodaltonwasamplifiedfromgenom
4、eofmycobacteriumtuberculosisH37Rvstrainbypolymerasechainreaction(PCR)andcorrectlyinsertedintocorrespondingsitesofeukaryoticexpressionvectorpcDNA3.1(-)afterrestrictionendonucleasedigestion.TheexperimentalmicewasvaccinedbythisrecombinantplasmidDNA.Results:Thegenefra
5、gmentinsertedintothevectorpcDNA3.1(-)wastheHSP65geneofmycobacteriumtuberculosisH37Rvstrain,whichwasconfirmedbypartialnucleotidesequencing.Therewasspecifican2tibodyproduceinexperimentalmicevaccinedbytherecombinantplasmidDNAandthiscouldprotectmiceagainstinfectionofm
6、ycobacteriumtuberculosis.Conclusion:ThesuccessfulconstructionofrecombinanteukaryoticexpressionvectorbasedonHSP65geneofmycobacteriumtu2berculosis,suchrecombinantplasmidDNAinducedspecificantibodyproductioninexperimentalmice,laysthefoundationforfurtherresearchinginpr
7、eventionandtreatmentoftuberculosis.[Keywords]Mycobacteriumtuberculosis;HSP65;Eukaryoticexpressionvector 在传染性疾病的死因中,结核是魁首。近年来核病防治工作的首要任务。结核病发病率呈上升趋势,全球约有211亿人患有 热休克蛋白(HSP)是一类在原核和真核细胞中结核病,年新发病1000万,死亡300万,我国结核病高度保守的蛋白质,从细菌到人体细胞的HSP序列人600万,年新发病200万,死亡25万。移民、HIV有很高的
8、同源性,正常情况下,HSP参与一些重要的感染、传播性强的新型结核菌株的出现与多重耐药细胞生理活动,如蛋白质转位、折叠和装配,起着分224菌株是导致结核病发病率呈上升趋势的原因。BCG子伴侣的重要作用。当细胞在应激条件如感染、是目前唯一抗结核病的疫苗,可保护儿童免患播散发热、热休克、葡萄糖饥饿或细胞恶变时
