大豆抵抗SMV长距离运输机制的研究.pdf

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1、!QQ墨互2QQ墨Q主墨勺研究StudyonthemechanismofsoybeanresistanttoSMVlong--distancetransport学位申请人：姚贵滨指导教师：王冬梅教授学科专业：植物学学位类别：理学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二O一一年五月三十一日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑j量壅些太堂或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的

2、任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解逦j壁壅些太堂有关保留及使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门(机构)送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查(借)阅。本人授权煎jS壅些太堂可以将论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等方法加以保存或编成学位论文。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字Ft期：年月日学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：电话：邮编：过胞间连丝进行胞间运输，通过维管束

3、系统完成长距离运输。目前，关于病毒在胞间运输方面的研究报道较多，而在病毒的长距离运输方面，由于对维管束直接接种病毒存在一定的难度，人们对病毒长距离运输的研究还较少。本实验室前期工作已经证明，SMV接种大豆叶片后，在不亲和组合中胼胝质通过对胞间连丝颈部的修饰作用限制了病毒在胞间的转运，使病毒不能进入维管系统进行长距离运输，从而将病毒限制在叶片接种部位的很小区域内。为此我们提出，胼胝质在胞间连丝上的沉积是限制大豆花叶病毒在胞间转运的主要因素。本试验正是基于上述研究基础开展工作的，利用嫁接技术将大豆花叶病毒接种到维管束中，通过对嫁接部位的上位叶发病情况的观察、大豆

4、花叶病毒外壳蛋白基因的检测、胼胝质专一性染料苯胺蓝染色并辅以荧光显微镜观察以及药物学试验，探讨了胼胝质在大豆抵抗大豆花叶病毒长距离运输中的作用及其机制。本试验选用大豆品种冀豆7号、冀黄13号和nf-58为材料，大豆SMV株系为SC．8和N3，其中冀豆7号和冀黄13号分别与SMV株系SC_8组成亲和组合，冀豆7号和nf-58分别与SMV株系N3组成不亲和组合和亲和组合。获得的主要试验结果如下：1．通过对砧木和接穗苗龄的选择以及嫁接后温度和湿度的控制，成功将冀黄13号和nf-58嫁接到冀豆7号。2．在接穗冀黄13号叶片上进行摩擦接种SMV株系SC．8，在接种后6

5、天在砧木冀豆7号的茎和上位叶中能检测到SMV的CP基因，并随后在上位叶出现发病症状。表明利用嫁接技术已成功将病毒接种到砧木的维管束中，由于砧木冀豆7号与SMV株系SC．8为亲和组合，所以病毒经维管束的韧皮部运输到上位叶片中。3．在接穗nf-58叶片上进行摩擦接种SMV株系N3，在接种后6天在砧木冀豆7号的上位叶中未能检测到SMV的CP基因，上位叶也一直不表现发病症状，但是在冀豆7号的茎的下部检测到了SMV的CP基因，而茎的上部没能检测到SMV的CP基因。表明虽然利用嫁接技术成功将病毒接种到砧木的维管束中，但由于砧木冀豆7号与SMV株系N3为不亲和组合，所以病

6、毒在通过维管束的韧皮部向上运输过程中受到了限制。4．对结果2和3中的冀豆7号茎部制作石蜡切片，通过胼胝质专一性染料苯胺蓝染色观察发现，结果3中(冀豆7号与SMV株系N3为不亲和组合)茎的下部维管束筛板处能够观察到较强的胼胝质荧光，而在其茎的上部及结果2中(冀豆7号与SMV株系SC．8为亲和组合)茎部的维管束筛板处只观察到微弱的胼胝质荧光(或者没有观察到胼胝质荧光)。5．为了进一步探讨胼胝质在筛板上的沉积对限制SMV在维管束中完成长距离运输的作用，将nf-58嫁接到冀豆7号后，在nf-58叶片上预注射500I,tmol／L2．DDG(即胼胝质合成抑制因子)再经

7、摩擦接种SMV株系N3，6天后在冀豆7号的上位叶中即能检测到SMV的CP基因。对冀豆7号的茎部制作石蜡切片利用胼胝质专一性染料苯胺蓝染色观察发现，注药处理后在维管束的筛板处观察到的胼胝质荧光较不注药对照减弱了许多(或没有观察到胼胝质荧光)。综合上述试验结果，我们认为胼胝质对筛板的修饰是大豆限制SMV在维管束中进行长距离运输的主要因素。关键词：胼胝质；大豆花叶病毒；嫁接；长距离运输long-distancetransportSupervisor：ProfessorWangDongmeiSpecialty：BotanyAbstractAfterinfectedt

8、heplantsofsoybean,so明oeanm