CHO细胞的无血清培养.doc

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1、KCHO细胞CHO细胞即屮国仓细胞（Chinesehams®ovary）,该细咆H有不死性，班以传代门代以上，楚II前生物丁程上广泛便川的牢咆,金IH.界JIMIiEA应用J•人类佚病治疗或佚購馥防的基因工程产品约有二I多种，具屮只有一种（乙JfK苗）足山酵玛曲生产的•扎余所有产品都超IlCHO年胞和大肠杆苗生产的，大肠杆曲不能形成有活性的二衆体（如白介索2）.也不具有糊垄化的功能（如EPO）・而CHOAll具有如上的功施・因此CHO成为茨达堤杂11物人分子的理想宿主.另外CH0年胞在基因工程使用屮还有一个优点，该细迪屈于成纤维细胞（fibroblast）.是•种非分泌型细也它本身很

2、少分泌CHO内游蛋白，因此対目标蛋白分离纯化工作丨分有利.2、CHO细胞■清培养传统上CHO细匏的培养都是在DMEM/F12基础倍养基屮添加5-10的小牛血清（用于匣纽饭白）或胎牛血消（用于杂交辆生产）单抗来亢破的.虑清除了供给年胞的营养成分外.还能促进细抱开始合成DNA・对年胞的增荊有很大的作用c实脸证明・直淸在细胞的体外陪养屮提供了年胞增殖忻必潘的生长因子。但哺扎动物的直清价恪昂贵•成本S5不适于今天的人规模工业化生产.而目呐乳动物血浦作为补加物，存布许多问甌门先血淸的来源存存问邈，直浦来祿于特定的地区，因而如果该地区发生灾荒或牛济中流行次術，都可导致血清尖去供应海•血清批显之向

3、的差异人亜塩性差，山于鱼滴來祿于动物.动拘个体或群体的差异及时何上的差异都能牙皱符个批弓的直清不完全一样.从丸殂蛋白生产的角度来五，出于Q和Qc的耍或，毎换•个批弓的■稻,紀包含大罠的验证工作，这朋给生产帶来很大的咚烛。另外血淸来薄于动物因此经常被污染，污染的血済往往导致细迪生长缓慢，蛋白产显下降，仪至牙致细胞死亡°II的购自《•大公司的血淸虽能消灭编價和所有支原体，但很难探证除去所有的銚寺污染。Jffliff的成分I分复杂，紳研究农明.血濟除含有促进生长的活性成分外.还含冇-定的细胞術性物质和抑制物贰対細胞有去分化作用.龙响细咆功能的表达血淸复杂的成分也給唯因工程表达产物的下游工作

4、带來很夫的因难，因此成分明姗，价擀”挤的尤血消培养基成为cho养的一种必然需求°3、CHOSa胞的无血清培养基从血淸用养所面临的何理，我们不难fi•出：人们急切地需復找刊能够咎代血淸的物质，从而解决血淸埒养所面临的这一问題•’近I•年代也，科学家就开始硏宪尤・淸用那旌・姿发展尢血淸用养墓，必须找到适当的具有直淸功能的因r,in于虫淸的成分不淸而iu分复杂，具有多种促进维胞生长和増妣的因子，因此翌找測血淸咎代物定机当困邃的.人们己影发现比物质彳独或一起使用可以特代血汛这些物质分別是微显兀索、生长因子、激瓠蹈贡白、脂肪酸、芍抑制剂’微届兀索妃歩咆代谢所必需的，绘尢血済培养基的主姿添加物之

5、「铁、锌、硒竽都是不川缺少的.有些资料证明还緡燮铜、乩钳.帆3；元拓这些元索在血消培养屮山血消提供.在尢血清陪养屮需翌补加.促生长因子是尢血濟培养基的主姿补加物之一C現在研宛者己鄴从血渚、各种组织和生物成分屮用生物工程的方法.制取了各种促細胞生长物.如淤皮生长因子(EGF),成纤if細胞生长因子(FGF).1［小板生长因子(PDGF)、丄长调节1HSM)净现已证明很多激索具冇促进细咆生长的作用.橫沏索能促逍细抱利用旬曹盘和氨穰晚尢血消培养基竝乏对细胞的保护.血清后养残余的换蛋白的対血淸的损伤I分严重.因而无血清培养基必須添加轉抑制剂.脂类足细胞胆的主要成分.添加脂类叩以促进细胞增殖，

6、随右尢直淸培养基硏究的进一•步深入，无血清培养基将越來越尢善.九血清斥养试3&步骤仁实脸材料CHO细胞株购丁俄罗斯SoymAgromed・无血淆尽养慕(CHO・S・sFM1l｝炒〕Gibeo公词。2、实脸方法<1)无血渚培养基的甩制fl.90ml纯水溶解制备1升j£的袋裂GibeoCHO・S・sFM1l・加人2.45gNaHC03.ffl1NNaOH

7、使细也密度达5已05合/ml.然姑用竽体枳的CHO-S-SFM1I将细胞稀特到3x105个/ml,羅绫培养.車复上述傑D，“至血淸浓度降为0.1%后.用完全无・淸3«养基培养到3和06个/nW冋以3*105个/ml接仲，传50代，至此龙成适应工作.<3)细胞计数参阅4组织培胖技术41的方法，用血孩计数板计数.•4)CHO细咆农达EPO水平应用MIT比色法瀝定・4.无血清培养基的发展目前的无血淸協牌臬已进入第［代，第一代无血淸培养坯虽热不含有血淸，但含冇大忒