《农畜产品动物源性成分定性定量检测方法 NGS法》（征求意见稿）及编制说明.pdf

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1、ICS67.120.10X中华人民共和国国家标准GB/TXXXXX—202X农畜产品动物源性成分定性定量检测方法高通量测序（NGS）法Identificationofanimalorigininanimalproducts—NGSmethod点击此处添加与国际标准一致性程度的标识（征求意见稿）202X-XX-XX发布202X-XX-XX实施国家市场监督管理总局发布国家标准化管理委员会GB/TXXXXX—202X前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业农村部提出。本标准由全国屠宰加工标准化技术委员会归口。本标准起草单位：本标准主要起草

2、人：。IGB/TXXXXX—202X农畜产品动物源性成分定性定量检测方法高通量测序（NGS）法1范围本标准规定了采用NGS法农畜产品动物源性成分定量检测时，对农畜产品的样品采集要求、方法。本标准规定了农畜产品动物源性成分定量检测的NGS检测方法及结果分析的原理。本标准适用于基于农畜产品（畜类，禽类）肌肉组织的动物源性成分的检测，不适用于血液、毛发等样品类型。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3、GB/T5009.1-2013食品卫生检验方法理化部分总则GB/T30989-2014高通量基因测序技术规程GB/T33681.1-2017高通量基因测序样本预处理方法第1部分：动物组织样本预处理3术语和定义GB/T30989-2014及GB/T33681.1-2017界定的术语和定义适用于本文件。为了便于使用，以下重复列出了其中某些术语和定义。3.1高通量测序high-throughputgenesequencing区别于传统Sanger（双脱氧法）测序，，又称“下一代”测序技术（"Next-generation"sequencingtechnology），能够一次并行

4、对大量核酸分子进行平行序列测定的技术，通常一次测序反应能产出不低于100Mb的测序数据。[GB/T30989-2014，定义3.19，增加“又称“下一代”测序技术（"Next-generation"sequencingtechnology）”]4缩略语下列缩略语适用于本文件bp——碱基对（basepair）BWA——Burrows-wheeler比对软件（Burrows-WheelerAligner）DNA——脱氧核糖核苷酸（DeoxyriboNucleicAcid）EDTA——乙二胺四乙酸NGS——高通量测序（Next-generation"sequencingtech

5、nology）OD——吸光度（OpticalDensity）1GB/TXXXXX—202XPCR-free——无聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction-free）reads——测序读长（readlengthofgenesequences）RNaseA——核糖核酸酶A（ribonucleaseA）5检测原理本方法应用高通量测序，利用线粒体基因标签标准引物，采用带有index序列的标准引物，对待测样本的DNA样本进行PCR-free建库，并对所构建的文库进行测序。然后，通过对测序数据进行生物信息学比对分析，计算样品分别能比对回各个参考基因组的数据量的大

6、小和比例，即可对混合样品中的各成分进行准确定性和定量分析，如附录A所示。6试剂和材料除另有规定外，所有试剂应为分析纯或生化试剂，实验用水应符合GB/T6682的要求。6.1蛋白酶K溶液：冻干品，用双蒸水溶解为20mg/mL的溶液，分装后于-20℃保存。6.2无水乙醇、异丙醇（分析纯）6.3组织裂解液：0.1MEDTA0.25MTris-HCl酚氯仿异戊醇（25:24:1）（分析纯）6.4十二烷基磺酸钠(SDS)6.5PBS缓冲液6.6TE缓冲液6.7琼脂糖6.8RNaseA7主要仪器设备7.1磁力架——孔径：12mm；适用于1.5-2ml离心管7.2移液器——单道可调

7、量程移液器0.1-2.5μl、0.5-10μl、10-100μl、100-1000μl7.3PCR仪7.4超声打断仪7.5高速冷冻离心机7.6恒温水浴锅7.7-20℃冰箱7.8DNA浓度测定仪器7.9电泳仪2GB/TXXXXX—202X7.10凝胶成像系统7.11测序仪8样本采集与处理8.1样本采集要求样本的采集、运输、放置过程中应尽量避免受到其它种类样本的污染。在采样过程中应确保采样器具清洁、干燥、无异味。采样、制样器具及样本容器所用材质不应对采集样本造成污染。为了避免交叉污染，尽可能使用不同的采样器具采集不同的样本，盛装样