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时间:2020-03-27
《高效液相色谱仪分析测试-科标分析.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、高效液相色谱仪分析测试系统组成高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。工作原理分配系数与组分、流动相和固定相的热力学性质有关,也与温度、压力有关。在不同的
2、色谱分离机制中,K有不同的概念:吸附色谱法为吸附系数,离子交换色谱法为选择性系数(或称交换系数),凝胶色谱法为渗透参数。但一般情况可用分配系数来表示。在条件(流动相、固定相、温度和压力等)一定,样品浓度很低时(Cs、Cm很小)时,K只取决于组分的性质,而与浓度无关。这只是理想状态下的色谱条件,在这种条件下,得到的色谱峰为正常峰;在许多情况下,随着浓度的增大,K减小,这时色谱峰为拖尾峰;而有时随着溶质浓度增大,K也增大,这时色谱峰为前延峰。因此,只有尽可能减少进样量,使组分在柱内浓度降低,K恒定时,才能获得正常峰。延伸在同一色谱条
3、件下,样品中K值大的组分在固定相中滞留时间长,后流出色谱柱;K值小的组分则滞留时间短,先流出色谱柱。混合物中各组分的分配系数相差越大,越容易分离,因此混合物中各组分的分配系数不同是色谱分离的前提。在HPLC中,固定相确定后,K主要受流动相的性质影响。实践中主要靠调整流动相的组成配比及pH值,以获得组分间的分配系数差异及适宜的保留时间,达到分离的目的。色谱(highperformanceliquidchromatography,HPLC)也叫高压液相色谱(highpressureliquidchromatography)、高速液相
4、色谱(highspeedliquidchromatography)、高分离度液相色谱(highresolutionliquidchromatography)等。是在经典液相色谱法的基础上,于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀,小颗粒具有高柱效,但会引起高阻力,需用高压输送流动相,故又称高压液相色谱。又因分析速度快而称为高速液相色谱。高效液相色谱是目前应用最多的色谱分析方法,高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成,其整体组成类似于气相色谱
5、,但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳;进样系统要求进样便利切换严密;由于液体流动相粘度远远高于气体,为了减低柱压高效液相色谱的色谱柱一般比较粗,长度也远小于气相色谱柱。HPLC应用非常广泛,几乎遍及定量定性分析的各个领域。使用高效液相色谱时,液体待检测物被注入色谱柱,通过压力在固定相中移动,由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同,不同的物质顺序离开色谱柱,通过检测器得到不同的峰信号,最后通过分析比对这些信号来判断待测物所含有的物质。高效液相色谱作为一种重要的分析方法,广泛的应用于化学
6、和生化分析中。高效液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别,它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相,适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物。色谱特点高压——压力可达150~300kg/cm2。色谱柱每米降压为75kg/cm2以上。高速——流速为0.1~10.0mL/min。高效——塔板数可达5000/米。在一根柱中同时分离成份可达100种。高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。HPLC与经典液相色谱相比有以下优点:速度快——通常分析一个样品在15~30min,有些
7、样品甚至在5min内即可完成。分辨率高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng,荧光和电化学检测器可达0.1pg。色谱柱可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。样品量少,容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏,可以收集单一组分或做制备。主要类型液固吸附色谱1.1分离原理液固色谱是基于各组分吸附能力的差异进行混合物分离的,其固定相是固体吸附剂。1.2固定相;吸附色谱固定相可以分为极性和非极性两大类。1.3流动相;流动相要求:1.3.1选用的溶剂应当与固定相互不相溶,并能保持色谱柱的稳定
8、性1.3.2选用的溶剂应有高纯度,以防所含微量杂质在柱中积累,引起柱性能的改变。1.3.3选用的溶剂性能应与所使用的检测器相匹配,如果使用紫外吸收检测器,就不能选用在检测波长下有紫外吸收的溶剂;若使用示差折光检测器,就不能用梯度洗脱。1.3.4选用的溶剂应对样品
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