使用image J软件测定westernblot 结果的操作方法.doc

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1、使用imageJ软件测定westernblot结果的操作方法1打开您的文件。2Image>Type>8-bitto上单击将图像转换为灰度图像。3进入Process>SubtractBackgroundrollingballradius为50。这消除了一些图像的背景着色。4进入Analyze>SetMeasurements,勾选Area,MeanGrayValue,和IntegratedDensity.5进入Analyze>SetScale,依次输入像素值"pixels"Unitoflength6进入Edit>Invert（或按Ctrl+Shift+I）反转图像上的色彩。现在条带变成亮色，背景

2、变成暗区。这便于准确测定蛋白的表达量。7选择FreehandSelection工具8使用Freehandselections工具沿目标条带边缘画线，并将目标条带圈起来，画的过程中注意判断条带边缘。（我测试的心得：可以把照片放大，这样徒手画的边缘误差会小，或者画三次，三个结果取平均数）9点击analyze>measure(或ctrl+M)“results”窗口会弹出，您在步骤4中选择的测指标的值会出现。需要注意的是集成密度值（最后一列）是面积和平均灰度值的乘积。10使用Freehand工具继续选择一个条带，选好后按ctrl+m进行测量，results窗口会增加一列数据。重复此步骤测量所需的所有

3、条带。11完成测量后，可以在results窗口中的edit，selectall（ctrl+A），copy（ctrl+C），可以粘贴到excel中供统计使用。