基因工程练习题.doc

《基因工程练习题.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、1．cDNA克隆与基因组克隆有何不同?2．怎样将一个平末端DNA片段插入到EcoRI限制位点中去?3．在Cohen构建有生物功能重组体的第一步实验中，用EcoRI切割了R6-5质粒，然后转化E．coliC600，在卡那霉素抗性子板上筛选到了pSCl01，它是由R6-5的三个EcoRI片段组成，请推测这个质粒具有什么遗传特性?4．某学生在用EcoRI切割外源DNA片段时，出现了星号活性，请分析可能的原因?5．在序列5’—CGAACATATGGAGT-3’中含有一个6bp的Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列，该位点的序列可能是什么?6．用连接酶将Sau3AI('GATC

2、)切割的DNA与经BamHI(G'GATCC)切割的DNA连接起来后，能够被BamHI切割的机率有多大(用百分比表示)?7．用Klenow酶填补的办法可使5’黏性末端转变成平末端。这种方法常使DNA上的某些限制酶的识别位点消失。请问，对于下列限制酶，用这种方法处理会不会使它们的识别序列都消失?Sau3AI('GATC)；TaqI(T'CGA)，BssHⅡ(G'CGCGC)。8.以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆一个编码动物激素的基因，并使之在大肠杆菌中进行表达，简要说明实验中可能遇到的问题及可能的解决办法。9．假定你分离到一个E．coli的Thr-突变体，并推测有可

3、能是ThrA基因突变。请设计一个方案用PCR从染色体DNA扩增突变的ThrA基因，测定突变的序列。(注：E．coli野生型的ThrA基因的序列是已知的)10．酵母人工染色体要在酵母细胞中稳定存在，必须有哪些基本的结构?11．用EcoRI和HindⅢ分别切割同一来源的染色体DNA，并进行克隆，在前者的克隆中筛选到A基因，但在后者的克隆中未筛选到A基因，请说明原因。12．一个携带有氨苄和卡那霉素抗性基因的质粒被仅在卡那霉素基因中有识别位点的EcoRI消化。消化物与酵母DNA连接后转化对两种抗生素都敏感的E.coli菌株。(1)利用哪一种抗生素抗性选择接受了质粒的细胞

4、?(2)怎样区分接受了插入酵母DNA的质粒的克隆?13.限制性内切核酸酶BamHI和PstI切割某一DNA序列，结果如图。(1)指出切割后DNA分子的5’端和3’端；(2)如果你将切割后的DNA同DNA聚合酶、4种dNTP在一起温育，这些DNA末端会有什么样的变化?(3)经过(2)中的反应后，你还能够用T4DNA连接酶将BamHI末端连接起来吗?PstI末端呢？14．计算下列三种酶各自在某染色体DNA序列上识别位点间的平均距离：AluI：5’AGCT3’，EcoRI：5’GAATTC3’TCGA5’3’CTTAGG5’AcyI：5’GPuCGPyC3’3’CPy

5、GCPuG5’15.现有一段A基因序列：ATGCATAATCGACATCGTGATACAGATAATAATTTCTCAAAGGACGATGCTTGGTATAAGCTTTATTCTATACCTGACACAGGGCAAATAAGAAAATTTTCAGCATTAGCTAGATATGATCTCTGGTCAAAAGAATATGCAAGAGGTTTTGCTAAAACAGGAAAATCAGTAGCTGGATCCTAA已知：1、限制性核酸内切酶识别的碱基序列如下：NcoI:CCATGGBamHI:GGATCCEcoRI:GAATTC2、限制性核酸内切酶保护性碱基情况如下：Nco

6、I:CATGCCATGGCATG，BamHI:CGCGGATCCGCG,EcoRI:CCGGAATTCCGG3、载体pET-28含有NcoI、BamHI、EcoRI、HindⅢ、SacI单一限制性核酸内切酶识别序列。回答下面问题：1、在设计PCR引物时，P1引物中应该含有哪个限制酶的识别序列，P2引物中应该含有哪个限制酶的识别序列？2、设计1对PCR引物，写出P1和P2的引物序列。3、如果用琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，应该用多大浓度的琼脂糖凝胶比较合适？4、要求将A基因片段克隆至表达载体pET-28相应位点上，构建含此段基因的克隆质粒，写出将A基因克隆至pET

7、-28中的技术路线。叙述包涵体型异源蛋白的表达、分泌型异源蛋白的表达、融合型异源蛋白的表达的优缺点。16.依据下图设计实验，运用全酶解图谱法鉴定重组子。pUC182.7kbHindIIISphIPstISalIBamHISmaIKpnIEcoRIAprlacZ’oriBBEP4.0kb1.0kb0.8kb