人C-反应蛋白CRP-酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒).doc

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1、仅供科研使用，不得用于临床检验。人C-反应蛋白（CRP）酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒）说明书黄石市艾恩斯生物科技有限公司【产品名称】通用名称：人C-反应蛋白（CRP）酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒）英文名称：HumanC-reactiveprotein（CRP）ELISAKIT【包装规格】48人份/盒，96人份/盒【预期用途】仅供科研使用，定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中人C-反应蛋白（CRP）的浓度。【检验原理】本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被抗人C-反

2、应蛋白（CRP）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入人C-反应蛋白（CRP）校准品和待测样本，再加入另一株HRP标记的抗人C-反应蛋白（CRP）抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中人C-反应蛋白（CRP）的浓度正相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中人C-反应蛋白（CR

3、P）的浓度。【主要组成成分】主要成分组分数量主要成分校准品0.5ml/管*6管抗原配制的6个浓度标准品包被微孔板96T预包被固相抗体HRP标记抗体6mLHRP标记的检测抗体底物液A6mL过氧化脲工作液底物液B6mLTMB工作液20×浓缩洗涤液30mL含0.15%Tween20的PBS说明书1份--自封袋1个--5仅供科研使用，不得用于临床诊断。不干胶2片--校准品检测范围：0.156-10ng/ml。校准品已经通过测试，结果表明HBs抗原阴性，HIV1、HIV2和HCV抗体阴性，由于不存在一种试

4、验方法能够完全保证没有这些物质，本品必须按照具有潜在的感染性进行处理，处理过程应当遵循通用的安全措施。需要但未提供的材料及耗材1、酶标仪2、精密移液器及一次性吸头3、蒸馏水4、洗瓶或者自动洗板机5、37℃水浴锅或恒温箱6、500ml量筒7、无粉一次性乳胶手套【储存条件及有效期】1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和HRP标记抗体，有效期为14天，其

5、他成分在标签标明的有效期内是稳定的。【适用仪器】半自动的酶标仪，如ThermoMK3，或者国产酶标仪。【样本要求】样本类型和采集以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。1、细胞培养上清：4000rpm条件下离心20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在-20℃以下，避免反复冻融。2、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm条件下离心20min，小心地分离出血清，保存在-20℃以下，避免反复冻融。3、血浆：肝素，EDTA

6、，或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下，离心20分钟取上清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。5仅供科研使用，不得用于临床诊断。样本保存和稳定性样本在2-8℃条件下，可以储存72h，或者在-20℃储存6个月。样本收集后，不是一次检测完，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻。【检验方法】试剂准备1、使用前，所有的组分都要至少复温30min，确保充分复温到室温。2、浓缩洗涤液：从冰箱取出的浓缩洗涤液，会有结晶产生，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全

7、溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水，按1:20稀释，即1份的浓缩洗涤液，添加19份的蒸馏水。3、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1体积充分混合，混合后15分钟内使用。操作程序1、所有试剂和组分都先恢复到室温，标准品、质控品和样品，建议做复孔。2、按前面试剂准备中描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。3、从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。4、设置标准品孔、样本孔和空白孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL，样本孔加待测样本50μL，空白孔不加。5、除空白孔外，标准品孔和样本孔

8、，加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体100μL。6、用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。7、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置20s，甩去洗涤液，吸水纸上拍干。8、如此重复4次（共洗板5次）。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。9、将底物A和B按1:1体积充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育15m