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1、第25卷第2期中国中药杂志Vol.25,No.22000年2月ChinaJournalofChineseMateriaMedicaFeb.,2000金线莲与内生真菌共生培养体系的建立于雪梅,郭顺星(中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所,北京100094)[摘要]目的:建立金线莲与内生真菌共生培养体系,为研究内生真菌促进金线莲生长机理及金线莲栽培新方法奠定基础。方法:在金线莲组培苗基础上,将金线莲苗与真菌共培养,定期观察记录金线莲苗与真菌的生长状态,根据菌2苗共生特点筛选适合金线莲与内生真菌共生的培养条件。结果:建立了金线莲与内生真菌的共生培养
2、-1体系。最适共生培养基为(mg·L):NH4NO3825,KNO3950,MgSO4185,肌醇100,其它有机成分为MS培养基有-1-1机成分量的2/3,蔗糖15g·L,其它成分同MS培养基,琼脂9g·L,pH5.8。培养条件为培养温度24～25℃,光照150lx,光照时间11h。结论:在此共生培养体系中金线莲苗与所筛选出的优良菌种可形成内生菌根,并可长期共生,且真菌有促进金线莲生长发育作用。[关键词]共生体系;金线莲;内生真菌兰科植物中有许多名贵花卉和珍稀药用植物,芽转入MS培养基中成苗,1～2个月后,苗高2～4并且在自然条件下大都与真菌共生。
3、金线莲cm,根长0.5～1.5cm。Anoectochilusroxburghii(Wall.)Lindl为兰科花叶1.2.2菌种培养:将真菌接种到平皿麦麸培养基上开唇兰属植物,为名贵中草药,具有清热凉血、祛风培养7～10d。利湿、强心、固肾、利尿、平肝、降血压等功效。近年1.2.3供试培养基:A1MS培养基;B1MS培养基,来主要用于治疗高血压、糖尿病及肿瘤等疑难病症,无有机成分;C1MS培养基,无微量元素;D1MS培[1]养基,无蔗糖;E1NH-1引起医药界的广泛重视。民间称其为“神药”。由4NO3825mg·L,KNO3950-1-1-1于该植
4、物自然生态条件独特,繁殖率低,生长缓慢,mg·L,MgSO4185mg·L,肌醇100mg·L,其加上鸟类嗜食,特别是近年来对其需求量猛增,产区它有机成分为MS培养基有机成分量的2/3,蔗糖-1-1人们过度采挖,使得金线莲野生资源日渐枯竭。在15g·L,其它成分同MS培养基,琼脂9g·L,[2～4]野生金线莲的根中,我们已观察到内生真菌的存在。pH518。因此,建立金线莲与内生真菌共生培养体系,筛选促1.2.4共生培养条件的筛选:将金线莲无菌苗垂直进金线莲生长的优良共生菌种,进而研究金线莲与插入5种供试培养基中,每100ml三角瓶中2株幼内生真菌的关
5、系,对保护金线莲的种质资源,研究其苗,两苗相距1～1.5cm,培养10～15d时,将经麦新的栽培繁殖方法具有较大理论意义和应用价值。麸培养基活化的94017,94005两种真菌分别用打孔1实验材料与方法器(直径0.45cm)在菌落表面打取平板菌块,然后111实验材料用接种针将一平板菌块接种于与两苗相距3cm培植物材料为金线莲A.roxburghii无菌苗。真养基上,并稍将菌块按入培养基中。每种培养基均菌为分离自兰科植物的内生真菌,即解剖发现根细设对照(即只接苗不接种真菌)。每一处理重复3胞内存在真菌菌丝。其中94017真菌分离自金线瓶。培养温度24～
6、25℃,光照150lx,光照时间11莲,94005真菌分离自铁皮石斛Dendrobiumcan2h。定期观察记录金线莲苗与真菌的生长状态。1.2.5接菌后金线莲组织学观察:将苗从瓶中取didumWall.exLindl。出,洗去培养基,切取根段3～5cm固定于FAA液1.2方法中。常规石蜡包埋与切片,片厚15μm,番红固绿染1.2.1植物培养:用金线莲茎段、茎尖诱导出芽,将色,光学显微镜观察。[收稿日期]19992062182结果和分析[资助项目]国家自然科学基金资助项目(39970018)2.1不同培养基上菌2苗生长状态·81·第25卷第2期中国中
7、药杂志Vol.25,No.22000年2月ChinaJournalofChineseMateriaMedicaFeb.,2000在5种培养基上,94017真菌生长速度都较皮层细胞,而94005菌仅侵染根的部分表皮细胞。94005真菌快,这是由真菌自身特性决定的。在MS但在E培养基上菌苗培养的后期60d时94017,培养基上,两种真菌生长较快,94017菌接种10d即94005两菌均以菌丝结形式定殖于金线莲根表皮细侵染到植株下部茎1cm处。94005菌接种15～20d胞及少数在皮层最外一层细胞内,表皮细胞分布有与苗相接触。培养25～30d时,接种940
8、17菌的苗大量的菌丝,并可见菌丝碎段。表皮细胞壁及皮层基部出出褐色分泌物,接种94005菌的苗有的下部最外一
