斐林试剂和双缩脲试剂应该如何使用.doc

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1、斐林试剂和双缩脲试剂应该如何使用--------一道高考试题带来的思考人教版必修1《分子与细胞》中斐林试剂为质量浓度为0.1%NaOH和0.05%CuSO4组成，使用时两者先要1:1混合；双缩脲试剂为质量浓度为0.1%NaOH和0.01%CuSO4组成，使用时先要加双缩脲试剂A液（0.1%NaO）H1ml，再滴加3-4滴双缩脲试剂B（0.01%CuSO4）。笔者在看到2017年一道高考试题的D选项时产生了疑问，高考试题如下：[2017全国I卷]2.下列关于细胞结构与成分的叙述，错误的是（）A.细胞膜的完整性可用台盼蓝染色色法进行检测B.检测氨基酸的含量可用双缩脲试剂进行显色C.若要观察

2、处于细胞分裂中期的染色体可用醋酸洋红液染色D.斐林试剂是含有Cu2+的碱性溶液，可被葡萄糖还原成砖红色2+疑问：既然斐林试剂和双缩脲试剂的成分相同，原理都是碱性条件下的Cu与还原糖和蛋白质反应，那么在检测还原糖和蛋白质时斐林试剂和双缩脲试剂能否互换使用，与加入NaOH和CuSO4的量和先后顺序有无关系呢？为了解答疑问，笔者分别做了还原糖和蛋白质的检测实验。一、还原糖的检测组别组织123456782ml早酥梨研磨液待测组织样液：早酥梨研磨液实验步骤与实验结果：试剂用量0.5mlNaOH；0.5mlNaOH；0.5mlNaOH；0.5mlNaOH；4滴NaOH；0.5mlNaOH；0.5m

3、lNaOH；1mlCuSO40.5ml0.5ml0.5ml4滴0.5ml0.5ml1mlCuSO4CuSO4CuSO4CuSO4CuSO4CuSO4CuSO4试剂使NaOH先加先加NaOHNaOHNaOHNaOH用顺序和NaOHCuSO4和和和和CuSO4后加后加CuSO4CuSO4CuSO4CuSO4混合CuSO4NaOH混合混合混合混合条件50~65℃水浴加热现象砖红色砖红色砖红色砖红色砖红色棕色砖红色蓝色沉淀沉淀沉淀沉淀沉淀沉淀（颜色（颜色浅）浅）样液检测试剂0.1%NaOH和0.05%CuSO40.1%NaOH0.01%CuSO40.05%CuSO4结果分析：1.从1、2、3组

4、实验结果来看斐林试剂中无论NaOH和CuSO4混合使用，还是先加NaOH后加CuSO4，或者先加CuSO4后加NaOH都会出现砖红色沉淀，并且颜色差异不明显；2.比较1、4、5组结果，CuSO4的用量对颜色深浅的影响较大，而NaOH的用量对颜色影响不明显；3.分析1、6、7组结果，适当提高质量浓度为0.01%CuSO4的用量也可以出现砖红色沉淀。结论：1.用斐林试剂和双缩脲试剂都能检测还原糖；2.检测还原糖时与NaOH和CuSO4使用顺序没有太大关系；3.如果不营造碱性环境，不会出现砖红色；2+2+4.在碱性环境中，如果Cu的浓度过低，不会出现砖红色，随着Cu5.浓度的提高逐渐出现砖红

5、色，并且颜色会逐渐加深。二、蛋白质的检测组别组织样液检测试剂12342ml蛋清稀释液5670.1%NaOH和0.01%CuSO40.1%NaOH0.05%CuSO40.01%CuSO4待测组织样液：蛋清稀释液实验步骤和实验结果：试剂用量1ml0.5ml3滴1ml1滴3滴2滴NaOH；NaOH；NaOH；NaOH；NaOH；NaOH；CuSO42滴2滴2滴2滴2滴2滴CuSO4CuSO4CuSO4CuSO4CuSO4CuSO4试剂使用先加NaOH和先加先加先加先加顺序NaOH后CuSO4CuSO4后NaOH后CuSO4CuSO4加CuSO4混合加NaOH加CuSO4后加后加混合NaOHN

6、aOH现象紫色紫色紫色紫色（深）紫色（深）紫色（深）蓝色现象分析：1.从第7组结果得出如果不制造碱性环境，不会产生紫色；2.1、2、3组比较只要能制造碱性环境，都能出现紫色，与NaOH和CuSO4的添加顺序无关；3.从4、5、6组可以看出斐林试剂也能检测蛋白质，而且紫色要比1、2、3组要深。结论：1.斐林试剂和双缩脲试剂都能检测蛋白质；2.无论先加NaOH还是先加CuSO4或者两者混合加入都能产生紫色；3.1.使用0.05%CuSO4要比使用0.01%CuSO4产生的紫色颜色更深，更接近于蓝色。原理分析：2+2+2+在碱性条件下，Cu氧化性增强，能够氧化还原糖中的醛基，同时Cu被还原为

7、砖红色的Cu2O沉淀，只要保证营造碱性条件，有足够多的Cu被还原为Cu2O就能出现砖红色沉淀。双缩脲试剂原本是检测双缩脲（NH2-CO-NH-CO-N2H）的试剂，而蛋白质中的肽键（-CO-NH-）2+的结构和双缩脲的结构非常相似，在碱性条件下与Cu产生紫色的络2+合物，所以可以用双缩脲试剂检测三肽或三肽以上的化合物，在碱性条件下Cu与蛋白质中的肽键形成紫色的络合物。实验综合分析：1.斐林试剂和双缩脲试剂都能检测还原糖和蛋白质；2.在检测还原糖