2019-2020学年生物人教版选修3同步检测：1.2 基因工程的基本操作程序 Word版含解析.pdf

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1、1.2基因工程的基本操作程序理一理判一判1.PCR反应中温度的周期性改变是为了使DNA聚合酶催化不同的反应。(×)2．启动子和终止密码子均在胰岛素基因的转录中起作用。(×)3．为保证目的基因在水稻细胞中能够表达，载体上应含有特定的复制原点。(×)4．外源DNA必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能进行复制。(×)5．表达载体中的胰岛素基因可通过人肝细胞mRNA反转录获得。(×)6．人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性。(√)7．从大肠杆菌细胞中可获得人胰岛素基因的mRNA，说明目的基因完成了表达。(×)8．动物基因工程通常以受精卵作为受体细胞的根本原因是受

2、精卵能使目的基因高效表达。(×)悟一悟1.获取目的基因的不同方法(1)如果不知道目的基因的核苷酸序列，可以通过构建基因文库的方法，即通过受体菌储存并扩增目的基因后，从基因文库中获取目的基因。(2)如果知道目的基因的核苷酸序列，而且基因比较小，可以通过DNA合成仪，利用化学方法直接人工合成。(3)如果知道要扩增的目的基因及其两端的核苷酸序列，而且基因又比较大，可以通过RCR技术扩增。2．限制酶剪切目的基因与质粒的次数不同：获取一个目的基因需限制酶剪切2次，共产生4个黏性末端或平末端，切割质粒一般只需要限制酶剪切1次，产生2个黏性末端或平末端，因为质粒是环状DNA分子，而目的

3、基因在DNA分子链上。3．切割目的基因和载体并非只能用同一种限制酶：如果用两种不同限制酶切割后形成的黏性末端相同，则在DNA连接酶的作用下，目的基因与载体也可以连接起来。4．目的基因的插入点不是随意的：基因表达需要启动子与终止子的调控，所以目的基因应插入到启动子与终止子之间。5．基因工程操作过程中只有第三步“将目的基因导入受体细胞”没有碱基互补配对现象。6．在DNA分子、mRNA分子上检测目的基因是否插入、目的基因是否转录时，用的探针都是放射性同位素等标记的含有目的基因的DNA片段。检测原理都是碱基互补配对原则，只是被检测的物质不同，一个是转基因生物的基因组DNA，一个是

4、转基因生物细胞内的mRNA。7．进行翻译水平的检测，则是利用抗原与抗体特异性结合的原理。感悟体会：练一练1.[2019·全国卷Ⅰ]基因工程中可以通过PCR技术扩增目的基因。回答下列问题。(1)基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括______________和______________。(2)生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是____________。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是____________。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的_______

5、_____。(3)目前在PCR反应中使用Taq酶而不使用大肠杆菌DNA聚合酶的主要原因是________________________________________________________________________。解析：本题借助基因工程的相关知识，考查考生对生物学问题进行解释的能力；通过PCR与体内DNA复制的比较，体现了科学思维中分析与推断要素。(1)基因文库包括基因组文库和cDNA文库。(2)体内DNA复制时，需用解旋酶打开氢键使双链DNA解旋，而PCR扩增目的基因时，是借助高温加热至90～95℃使DNA变性解旋。(3)PCR反应体系中进行互补链的

6、合成时，温度需控制在70～75℃，则应使用耐高温的DNA聚合酶，即Taq酶，而不能使用大肠杆菌DNA聚合酶(高温下会失活)。答案：(1)基因组文库cDNA文库(2)解旋酶加热至90～95℃氢键(3)Taq酶热稳定性高，而大肠杆菌DNA聚合酶在高温下会失活2．[2019·江苏卷]图1是某基因工程中构建重组质粒的过程示意图，载体质粒P0具有四环素抗性基因(tetr)和氨苄青霉素抗性基因(ampr)。请回答下列问题：(1)EcoRV酶切位点为错误!，EcoRV酶切出来的线性载体P1为________末端。(2)用TaqDNA聚合酶进行PCR扩增获得的目的基因片段，其两端各自带有

7、一个腺嘌呤脱氧核苷酸。载体P1用酶处理，在两端各添加了一个碱基为________的脱氧核苷酸，形成P2；P2和目的基因片段在________酶作用下，形成重组质粒P3。(3)为筛选出含有重组质粒P3的菌落，采用含有不同抗生素的平板进行筛选，得到A、B、C三类菌落，其生长情况如下表(“＋”代表生长，“－”代表不生长)。根据表中结果判断，应选择的菌落是________(填表中字母)类，另外两类菌落质粒导入情况分别是______________________、________________________。菌落类型ABC平板类型