2014实验专题1（显微观察类140212）教学内容.ppt

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1、2013----2014学年度实验专题复习培养基的配制—称量→溶化→调pH→分装→包扎灭菌（高压蒸汽灭菌）接种固体培养基—平板划线（接种环）、稀释涂布（玻璃刮刀）液体培养基—用接种环蘸取菌液（扩大培养）培养固体培养基—倒置，37℃恒温培养箱，24h左右液体培养基—空气浴或水浴培养箱（摇床），震荡培养固体培养基—单菌落液体培养基—培养液变浑浊观察废弃菌种和培养基灭菌后丢弃微生物培养的基本程序2.实验原理：⑴结构本身有颜色、易观察，不染色（+变化原理）（如观察叶绿体、细胞质流动、质壁分离及复原）⑵结构本身无颜色

2、、不易观察，需染色①观察细胞的活性或生理变化—活体染色（如观察线粒体—健那绿B；观察液泡—中性红）②观察静态结构或细胞内特定物质的分布—染色（如DNA、RNA的分布、脂肪的鉴定、有丝分裂）（3）在可计量空间内计数微生物的数量统计。2.实验原理：3.材料用具：⑴材料：易获得、易处理、易观察⑵用具和试剂（据此可以推测实验原理）4.方法步骤：取材→制片→观察预处理时间部位方法撕、切、涂、挑、剪观察漂洗盖片取材展平滴水染色实验材料预处理取材部位及方法花生种子浸泡切花生子叶薄片撕取洋葱鳞片叶内表皮刮取口腔上皮细胞刮取

3、口腔上皮细胞黑藻光下、温暖条件下培养剪取取黑藻叶片观察植物细胞的质壁分离及复原组织中脂肪的检测DNA和RNA的分布观察叶绿体和胞质环流观察线粒体观察细胞有丝分裂剪取根尖撕取洋葱鳞片叶外表皮水培洋葱或大蒜等实验染色试剂染色现象及原理组织中蛋白质检测组织中还原糖检测DNA粗提取和鉴定亚硝酸盐的定量测定苏丹Ⅲ或Ⅳ甲基绿、派洛宁龙胆紫或醋酸洋红双缩脲试剂斐林或本尼迪特二苯胺对氨基苯磺酸、N-1-萘基乙二胺溶液、乙酸玫瑰红色蓝色还原Cu（OH）2为砖红色Cu2O碱性条件下，紫色染色体被碱性染料着色橘黄色或红色，亲脂蓝

4、绿色、红色，竞争结合组织中脂肪的检测DNA和RNA的分布细胞的有丝分裂观察线粒体健那绿专一性活细胞染料，蓝绿5.临时装片制作擦滴取展盖染2021/9/9he9临时装片的制作方法以下制片方法分别用于什么实验？切片法整体装片法涂片法压片法撕片法2021/9/9he106.显微观察的一般方法：⑴显微镜结构:机械结构、光学结构凹面、平面反光镜、遮光器、通光孔物镜、目镜镜头长短与放大倍数he12⑵显微镜取放⑶显微观察：（低倍→高倍）低倍显微镜观察：调光→调焦（粗、细）→调物象位置2021/9/9he14普通显微镜的一

5、般操作程序低倍镜高倍镜①把装片放在载物台上，使材料对准通光孔，压上压片夹②转动粗准焦螺旋下降镜筒，使低倍物镜接近装片切勿触及③左眼注视目镜中，转动粗准焦螺旋，慢慢上升镜筒，直到视野中出现物象为止④转动细准焦螺旋，使视野中物象清淅①在低倍镜下看清物象，要把目标移到视野中央；②转动转换器，使高倍物镜对准通光孔；③顺时针或逆时针转动细准焦螺旋，直到调清物象为止④改用凹面反光镜，增加视野光亮度2021/9/9he15问题：低倍镜和高倍镜光亮度差异及调节无色透明结构的观察手动装片的方向和视野中物象移动方向的关系低倍物

6、镜转换为高倍物镜的操作（4）成像问题倒像---移片放大倍率---目х物视野直径与放大倍率成反比放大倍数越大，视野亮度越小2021/9/9he17苏丹Ⅲ染色结果2021/9/9181猪脂肪细胞苏丹Ⅲ染色10分钟实验步骤2021/9/9he23水培促根长至1cm育根鉴别分裂相绘出生物图观察10%盐酸10~15min解离10~11或15~16时剪根用清水反复冲洗2~3次漂洗―→龙胆紫染液30秒染色盖片后缓挤压、轻扣击压片用显微镜观察根尖分生组织细胞的有丝分裂质壁分离及复原实验现象2021/9/9he242021/

7、9/9he252021/9/9he26保卫细胞气孔（2005全国）植物叶片表皮上分布着大量的气孔，气孔结构如图所示。当组成气孔的细胞（保卫细胞）吸水后，会膨胀变形，气孔开启。反之细胞失水收缩，气孔关闭。请根据所给的材料和用具，设计一个实验，证明气孔具有开启和关闭的功能。要求写出实验材料与主要用具、实验步骤、预测实验结果并做出解释。2.实验原理?1.实验目的?3.材料用具:4.方法步骤:⑴取材:⑶观察：⑵制片:⑷处理:⑸再观察:菠菜、清水、浓盐水、盖玻片、载玻片、显微镜、吸水纸、滴管、镊子等。用镊子撕取菠菜叶

8、下表皮载玻片上滴一滴清水，将下表皮平展放入清水中，盖上盖玻片，制成临时装片。将临时装片放在显微镜的载物台上，先在低倍镜下找到气孔，移到视野中央，再用高倍镜进行观察，记录观察到的气孔状态。在盖玻片的一侧滴上浓盐水，在另一侧用吸水纸引流，反复多次。连续观察气孔的变化，并作记录。质壁分离及其复原实验的应用5.预期实验结果(现象)及解释：在清水中气孔开启:因为当细胞液浓度大于细胞外溶液的浓度时，保卫细胞吸水膨胀变形，气孔