实验4测定细菌生长曲线课件.ppt

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1、实验4、测定细菌生长曲线一、实验目的1.了解细菌生长曲线的特征，认识微生物在一定条件下生长繁殖的规律。2.掌握用细菌悬液的浑浊度间接测定细菌生长的方法。3.学习液体培养基的配制及接种方法。二、实验内容测定大肠杆菌、枯草杆菌的生长曲线将一定量的细菌接种在液体培养基内，一定条件下培养，细菌的生长繁殖具有一定的规律性。以细菌活菌数的对数作纵坐标，培养时间作横坐标，可绘成一条曲线，称为生长曲线。三、实验原理细菌的生长曲线分为：迟缓期、对数期、稳定期和衰退期。其表示细菌从开始生长到死亡全过程的动态。测定微生物的生长曲线对于了解和把

2、握生物的生长规律是很有帮助的。测定微生物生长曲线的方法有血球计数法、平板菌落计数法、称重法和比浊法等。比浊法：由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比。故可用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。将所测的光密度值（OD）与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线（注意：由于光密度表示的是培养液的总数，包括活菌与死菌所测的生长曲线衰亡期不明显）。微生物的典型生长曲线图Ⅰ.延滞期，Ⅱ.指数期，Ⅲ.稳定期，Ⅳ.衰亡期四、实验仪器、材料和用具仪器：摇床、分光光度计、取液器。微生物材料大肠杆菌菌液、枯草杆菌菌液培

3、养基肉汤蛋白胨液体培养基用具玻璃比色皿，三角瓶，酒精灯，接种环。五、准备步骤准备菌种：将大肠杆菌和枯草杆菌分别接到于肉汤蛋白胨液体培养基中，37℃振荡培养14-18h。另准备大肠杆菌和枯草杆菌斜面种子各1支。接种：分别取5ml大肠杆菌或枯草杆菌液接种到装有100ml培养液的三角瓶中，放摇床37℃，200rmp振荡培养。同时分别从大肠杆菌或枯草杆菌斜面取菌接种于100ml培养液中，同样条件培养。测定（OD）每小时吸取200ul培养液到2800ul蒸馏水中摇匀，以蒸馏水为对照，选420nm波长进行光密度（OD值）的测定（注意

4、应测定0h的光密度值）。每台分光光度计固定在1个参比杯，每人只能在同一台分光光度计上测量（注意波长调好后，不要动波长旋钮）。1）绘制大肠杆菌和枯草杆菌在两种接种方法下的生长曲线。（标出生长曲线中四个时期的位置和名称）2）为什么用比浊法测定的细菌生长只是表示细菌的相对生长状况？3）生长曲线中为什么会出现稳定期和衰退期？在生产实践中怎样缩短延迟期？怎样延长对数期及稳定期？怎样控制衰退期？4）接种时种子在什么条件下为宜，液体种子比斜面种子为什么优越？六、结果与讨论