动物细胞培养和核移植技术教学用课件.ppt

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1、专题2动物细胞工程植物细胞工程常用的技术手段有哪些？那么动物细胞常用的技术手段呢？植物组织培养植物体细胞杂交问题探讨动物细胞培养动物细胞融合生产单克隆抗体动物细胞核移植动物细胞工程常用技术其中动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础动物细胞培养和核移植技术学习目标：1、简述动物细胞培养的过程、条件及应用2、对比说出动物细胞培养与植物组织培养原理、条件、结果、培养目的一.动物细胞培养从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。(一)概念一、动物细胞培养过

2、程阅读“动物细胞培养过程”并思考：1、动物细胞培养的技术实施的原理是什么？特点是什么？2、为什么要对取出的动物组织进行处理，使细胞分散？3、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白酶可以吗？4、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？5、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？6、简述动物细胞培养的操作过程。1、动物细胞培养的技术实施的原理是什么？原理是细胞增殖（有丝分裂）。一、动物细胞培养过程动物细胞生长特点：细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称

3、为细胞贴壁。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。细胞贴壁过程那么什么是接触抑制？接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。50代以后失去接触抑制接触抑制动物细胞生长特性部分细胞突变，获得不死性，向癌细胞方向发展，糖蛋白减少。2、为什么要对取出的动物组织进行处理，使细胞分散？分散的单个细胞容易摄取所需的营

4、养，排出代谢废物；而用大块组织培养时，内部细胞的营养供应和代谢废物的排出都较困难。一、动物细胞培养过程3、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白酶可以吗？细胞间的物质主要是蛋白质（胶原纤维）。胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境pH为7.2～8.4。多数动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4。一、动物细胞培养过程4、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对

5、细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。一、动物细胞培养过程5、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们的细胞分化程度低，增殖能力强，分裂旺盛，容易培养。一、动物细胞培养过程6、简述动物细胞培养的操作过程分离组织（低幼动物）分散细胞（胰蛋白酶）原代培养（细胞增殖）传代培养（细胞增殖）分装聚焦一、动物细胞培养过程深度思考：7、什么是原代培养、传代培养？为什么要进行传代培养？8、传代培养中，第10代细胞与第50代以后细胞的主要区别是什么？9、你

6、如何解释“多利”的早衰现象？一、动物细胞培养过程10、动物细胞培养能否象植物组织培养那样获得克隆个体？需要诱导其脱分化的过程吗？7、什么是原代培养、传代培养？为什么要进行传代培养？原代培养：取材（动物组织）→细胞分散→初次培养传代培养：培养的细胞→细胞分散→继续培养进行传代培养的原因：接触抑制一、动物细胞培养过程8、传代培养中，第10代细胞与第50代以后细胞的主要区别是什么？细胞癌变,失去接触抑制特性。一、动物细胞培养过程9、你如何解释“多利”的早衰现象？培育“多利”所取细胞核来自成年羊。从细胞年龄来看，

7、“多利”出生时，已是“羊”到中年。一、动物细胞培养过程10、动物细胞培养能否象植物组织培养那样获得克隆个体？需要诱导其脱分化的过程吗？不可以，因为高度分化的动物细胞的全能性受到抑制。不需要诱导其脱分化。一、动物细胞培养过程小结过程：幼龄动物或胚胎的组织、器官细胞悬浮液（单个细胞）胰蛋白酶动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。（分解弹性纤维）10代细胞原代培养50代细胞传代培养细胞株无限传代细胞系遗传物质未改变遗传物质改变接触抑制剪碎一、动物细胞培

8、养过程动物细胞培养不能最终培养成生物体原代培养(primaryculture)定义：把第1代细胞的培养与传10代以内的细胞培养统称为原代培养。过程：从动物机体中取出组织剪碎加胰蛋白酶细胞游离加培养液将细胞接种到培养瓶内培养（1—2天换一次培养液）细胞贴壁生长长成单层细胞取材（动物组织）→细胞分散→初次培养传代培养(subculture)定义：当原代培养的细胞生长停止，这时如果要使细胞继续生长，就要及时用胰蛋白酶