考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量.doc

《考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量一、实验目的掌握考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的原理和方法。学习分光光度计的原理及使用方法。二、实验原理三、实验步骤试剂试管编号01234567标准蛋白质溶液/ml0.000.020.040.060.080.1样品0.1样品0.1相当于蛋白质含量/微克0.0020406080100未知未知蒸馏水/ml0.10.080.060.040.02000考马斯亮蓝染液/ml333333331、打开分光光度计，预热30min。2、取8支洁净的干燥试管，按上表进行编号，0~5号用于标准曲线的绘制，6号

2、、7号用于样品溶液的测定。3、取微量注射器，用蒸馏水清洗3次，再用标准蛋白质溶液润洗2次。按上表在0~5号试管中加入标准蛋白质溶液，然后用蒸馏水洗3次，再按上表在0~5号试管中加入相应含量的蒸馏水。4、微量注射器用样品润洗2次，抽取100微克的样品加入到6号试管，再抽取100微克加到7号试管。用蒸馏水清洗微量注射器。5、取5ml的移液管，用蒸馏水清洗3次，用考马斯亮蓝染液润洗2次。在0~7号试管中各加入3.0ml的考马斯亮蓝染液。振荡试管，混合均匀。6、待其充分反应（约2分钟）后，用分光光度计分别测它的吸光值。7

3、、用0~5号的数据。以蛋白质浓度为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。8、由样品液的吸光值查标准曲线求出蛋白质含量。四、实验结果与分析试管编号01234567A59500.3830.6030.8711.0931.1890.8760.836样品溶液吸光值=（0.876+0.836）/2=0.856查标准曲线得样品液的蛋白质含量为66.0微克分析：考马斯亮蓝G-250能与蛋白质结合，染液与蛋白质结合后引起染料最大吸收峰的改变，从464nm变为595nm，光吸收值增加。同时蛋白质——染料复合物具有高的消光系数，大大

4、提高了蛋白质测定的灵敏度，最低检出量为1微克蛋白质。染料与蛋白质结合迅速约2min，结合物的颜色在1h内保持稳定。一些阳离子如K+,Na+,Mg2+以及（NH4）2SO4，乙醇等物质不干扰测定，而大量的去污剂如T-ritonX-100,SDS等则严重干扰测定，少量的去污剂可通过用适当的对照而消除。优点：染色法简单迅速，干扰物质少，灵敏度高。缺点：每次测量都得重新绘制标准曲线。注意事项：1、每次测量吸收值都应用0号试管中的溶液去校准，以免后面的结果偏差过大。2、0号试管起空白对照的作用，消除一定的系统误差。3、6、

5、7号实验的关键，它们之间的吸收值应非常接近，误差保持在10%的范围内。如果误差超过这个范围，则实验宣告失败。亲爱的用户：烟雨江南，画屏如展。在那桃花盛开的地方，在这醉人芬芳的季节，愿你生活像春天一样阳光，心情像桃花一样美丽，感谢你的阅读。1、最困难的事就是认识自己。21.7.277.27.202120:0420:04:43七月-2120:042、自知之明是最难得的知识。二〇二一年七月二十七日2021年7月27日星期二3、越是无能的人，越喜欢挑剔别人。20:047.27.202120:047.27.202120:0

6、420:04:437.27.202120:047.27.20214、与肝胆人共事，无字句处读书。7.27.20217.27.202120:0420:0420:04:4320:04:435、三军可夺帅也。星期二,七月27,2021七月21星期二,七月27,20217/27/20216、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。8时4分8时4分27-七月-217.27.20217、人生就是学校。21.7.2721.7.2721.7.27。2021年7月27日星期二二〇二一年七月二十七日8、你让爱生命吗，那么不要浪

7、费时间。20:0420:04:437.27.2021星期二,七月27,2021