DNA半保留复制方式的证明2013课件.ppt

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1、半保留复制方式的证明DNADNA复制方式的三种可能分散复制（Dispersivereplication）亲代DNA分子在复制过程中分散到子代的DNA分子中返回全保留复制（Conservativereplication）亲代DNA分子在复制过程结束后不分开，复制出全新的子代DNA分子返回半保留复制（Semiconservativereplication）每个子代DNA分子的一条链来自亲代DNA，另一条链则是新合成的提出证明半保留复制的与JamesWatson(1928-)FrancisCrick(1916-2004)1

2、957年，Watson和Crick在发表文章提出DNA的双螺旋结构后不久，就根据DNA分子的结构提出了DNA分子的半保留复制假说。DNA半保留复制方式的提出返回MatthewMeselson（1930-）FranklinStahl（1929-）实验过程Meselson-Stahl实验1958年，Meselson和Stahl在加州工学院工作期间，利用大肠杆菌研究遗传物质DNA。用15NH4Cl作氮源的培养基N培养数代使碱基中的14N全被置换为15N用14NH4Cl作氮源的培养基培养，每隔一定时间取样，分离其DNA并进行

3、密度梯度离心结果E.coliMeselson和Stahl的实验densitygradientcentrifugationCs＋离子在水中会下沉，同时也会扩散。a、如果扩散速度接近或大于下沉速度，就等于没有下沉现象。b、如果施以高速离心，加速Cs＋下沉速度，使其超过扩散速度，Cs＋会部分下沉形成一个浓度的梯度（gradient），也就是密度的梯度。c、将DNA溶解于适当浓度的CsCl水溶液中，并以140,000g高速离心，DNA就会跑到离心管中某一相相当它密度的位置，形成一个带状。在这一位置中，CsCl溶液的密度等于D

4、NA的密度。d、返回CsCl平衡密度梯度离心结果原本在有15NH4Cl中培养的细菌DNA最重(15N/15N）在14NH4Cl中培养过一代后，得到的DNA密度居中(14N/15N），此时原来的(15N/15N）不见了再过一代之后，又出现两种密度，除了一个居中(14N/15N），又有一种更轻的(14N/14N）结果原本在有15NH4Cl中培养的细菌DNA最重(15N/15N）在14NH4Cl中培养过一代后，得到的DNA密度居中(14N/15N），此时原来的(15N/15N）不见了再过一代之后，又出现两种密度，除了一个居

5、中(14N/15N），又有一种更轻的(14N/14N）结果分析如果复制是分散型的话，第一代之后会产生半重半轻的，但是第二代之后应该是介于半重半轻与全轻之间的分布，不会分开成两种分布。如果DNA是按照全保留型复制的模式，一代之后应该会有两个分离密度形成。一个是原来的重的(15N)，一个是新的轻的(14N)。不会有半重半轻的。因为离心过程中先后出现了三个分离密度，所以MatthewMeselson与FranklinStahl的结果很明显地告诉我们DNA的复制模式是半保留型的。结果分析如果复制是分散型的话，第一代之后会产生

6、半重半轻的，但是第二代之后应该是介于半重半轻与全轻之间的分布，不会分开成两种分布。如果DNA是按照全保留型复制的模式，一代之后应该会有两个分离密度形成。一个是原来的重的(15N)，一个是新的轻的(14N)。不会有半重半轻的。因为离心过程中先后出现了三个分离密度，所以MatthewMeselson与FranklinStahl的结果很明显地告诉我们DNA的复制模式是半保留型的。结论结果分析正确半保留复制（Semiconservativereplication）DNA复制方式的三种可能谢谢