管碟法测定抗生素效价解答课件.ppt

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1、抗生素微生物测定法一、概述1.抗生素的概念及抗生素的生物检定抗生素是由微生物所产生的极微量便具有选择性地杀死或抑制其他病原微生物生长的一类天然有机化合物。抗生素的生物检定是以抗生素对微生物的抗菌效力作为效价的衡量标准。2.抗生素的效价和单位抗生素的含量用效价和单位表示。该词有时不加区别统称为效价单位。效价（ｐotency），指检品的实际单位数与其标示量的比值。常表示为效价的百分数。单位（unit,u）单位是衡量抗生素有效成分的具体尺度。（１）重量单位以抗生素的生物活性部分重量作单位１微克（ｕｇ）＝１单位，１毫克＝１０００单位。（２）类似重量单位以特定的纯粹抗生素

2、盐类的重量作为１单位。如纯粹金霉素盐酸盐及四环素盐酸盐（包括无生物活性的盐酸根在内）１微克（ｕｇ）＝１单位，１毫克＝１０００个单位。这是根据国际使用习惯而来的。（３）质量折算单位以特定的纯抗生素盐的质量为单位而加以折算。青霉素0.6ug为1单位（４）特定单位以特定的抗生素标准品的某一质量定为一单位。管碟法浊度法抗生素微生物检定法1、管碟法：是利用抗生素在摊布特定试验菌的固体培养基内呈球面形扩散，形成含有一定浓度抗生素球形区，抑制了试验菌的繁殖而呈现出的透明抑菌圈。此法系根据抗生素在一定浓度范围内，对数剂量与抑菌圈面积呈线性关系，通过比较标准品与供试品产生抑菌圈的

3、大小，计算出供试品的效价。2、浊度法系利用抗生素在液体培养基中对试验菌生长的抑制作用，通过测定培养后细菌浊度值的大小，比较标准品与供试品对试验菌生长抑制的程度，以测定供试品效价的一种方法。管碟法测定抗生素效价原理和方法一、原理在一定的抗生素浓度范围内，对数剂量(浓度)与抑菌圈的表面积或直径成正比，可以得出一条曲线。抗生素浓度换算成对数，则抑菌圈直径与抗生素对数成直线关系2.原理－抑菌圈的形成两种互动作用：一种是抗生素溶液向培养基内呈球面状扩散作用；另一种是试验菌的生长作用。当培养到一定时间，琼脂培养基中的两种互动作用达到动态平衡时，琼脂培养基中便形成透明的抑菌

4、圈。即：在抑菌圈中因抗生素浓度高于抑菌浓度，试验菌生长受到抑制，此处琼脂培养基成透明状；在抑菌圈边缘抗生素浓度恰好等于抗生素最低抑菌浓度。一、试验前准备双碟的挑选内径约90mm，硬质玻璃或塑料培养平皿，水平透明，无色斑气泡物品的清洗、灭菌培养皿、钢管、刻度吸管清洗后160℃干热灭菌2小时或121℃高压蒸汽灭菌30min，放置室温备用；陶瓷瓦盖要定期清洗干燥。牛津杯的挑选内径（6.0±0.1）mm，高（10.0±0.1）mm，外径（7.8±0.1）mm，重量差异不超过±0.01g，光洁平坦缓冲液的制备磷酸盐缓冲液（pH6.0）取磷酸氢二钾2g与磷酸二氢钾8g，加水

5、使成1000ml，滤过。磷酸盐缓冲液（pH7.0）取磷酸氢二钠（Na2HPO4*12H2O）9.39g与磷酸二氢钾3.5g，加水使成1000ml，滤过。磷酸盐缓冲液（pH7.8）取磷酸氢二钾5.59g与磷酸二氢钾0.41g，加水使成1000ml，滤过。基本要点：①高剂量抗生素溶液所形成的抑菌圈直径在18～22mm；②高、低剂量所形成的抑菌圈之差最好大于2mm，有些抗生素的差数可较小；③高、低剂量之比一般用2:1，当高、低剂量所致的抑菌圈差别较小时，可用高低剂量之比为4:1的比率。仪器与用具1.操作室2.双碟3.陶瓦盖4.钢管5.钢管放置器6.恒温培养箱7.灭菌刻

6、度吸管8.玻璃容器9.称量瓶10.毛细滴管或可调式移液器（1～1000μl)11.天平12.抑菌圈(直径)测量仪。13.超净工作台　用于菌种的接种或传代。超净工作台须置洁净工作室或半无菌室内。检定菌的来源：检定菌种由中监所所提供的冷冻干燥品。检定菌的传代和接种：芽胞杆菌3～6个月（其他细菌每个月）用普通琼脂斜面传代1次，将新传代的培养物代替原有的菌种，作为工作用（阳性对照）菌种。传代和接种在菌种接种室内按无菌操作要求进行。冷冻菌种安瓶的接种。用75%酒精棉擦净菌种安瓿的外壁，稍干。点燃酒精灯，将安瓿的封口，一端在火焰上烧灼红热用毛细管吸取灭菌水少许在灼热处，使其

7、骤冷而炸裂，另取1支灭菌毛细滴管，在火焰旁吸取少量灭菌水，加至菌种管底部，将冻干菌块搅动促使溶解，随即吸出管内菌液，分别接种至营养琼脂斜面，将营养琼脂斜面琼脂斜面于37℃恒温培养24小时。管碟法的操作步骤预试验→试验准备→双碟底层的制备→供试品、标准品溶液的制备→菌层的制备→滴加抗生素溶液→双碟的培养→抑菌圈的测量→结果的可靠性检验及效价测定预试验：确定最佳的试验条件：调整试验菌的浓度、使用量、抗生素终浓度、培养基等，使抑菌圈的大小符合规定：高剂量浓度溶液所致的抑菌圈直径在18～22mm。高剂量与低剂量的抑菌圈直径之差最好不小于2mm。高低剂量之比为2:1（如高

8、、低剂量所致的抑菌圈差别