微生物实验室无菌操作技术规范.docx

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1、1.目的规范无菌操作流程，减少及避免发生染菌现象出现。2.使用范围无菌室及洁净区的操作。3.无菌操作技术原则3.1环境要清洁，在每次无菌操作结束后都需要对环境进行清理、清洗；且避免操作前进行清扫。3.2做好个人卫生，进入无菌室前需修剪指甲、洗手，穿好无菌服，帽子需遮住所有头发，口罩遮住口鼻。3.3在无菌操作时，不可讲话，打喷嚏，对怀疑染菌的无菌物品，不可使用。4.内容4.1.1准备：工作人员着装整洁，洗手、戴口罩、修剪指甲；备齐用物（如：接种针、接种环、酒精灯、斜面、平皿、摇瓶、75%酒精棉、无菌水等）；核对无菌用品，接种菌种的种类、型号。4.1.2所有实验使用的物品都需要进行消毒、

2、灭杀；进入洁净区前需要经传递窗进行紫外表面消毒30min以上；4.1.3开始实验前需要打开超净台的紫外灯，消毒半个小时以上；超净台避免放入过多的物品（一般只放入当次的实验所有的物品），所使用的试剂和耗材都需事先进行灭菌（灭菌日期超过4天的需重新消毒）。4.1.4进入洁净区前关闭紫外灯，并打开风机，等待半个小时以上，使臭氧尽量排放干净。4.1.5除去手腕等部位的饰品，穿好无菌服，戴好头套、口罩，做到“三不漏”：不暴漏头发，不暴漏口鼻，不暴漏躯干皮肤和衣物。4.1.6双手要进行清洗、消毒。4.1.7要经风淋室风淋30秒后再进入洁净室。4.1.8在局部百级区域操作要戴一次性无菌手套。4.1

3、.9实验操作过程中应尽量减少进入洁净区的人员（不超过4人/间）并尽量减少人员走动。4.1.10所有要放入超净工作台的物品都需进过消毒液喷洒擦拭消毒。4.1.11无菌物品若取离超净台则视为已污染，不得放回再用；无菌液体在取离超净台前必须密封其开口；密封的无菌液体容器在放入超净台后，对其开口前须对开口在酒精灯火焰上烧烤。4.1.12在拆开任何一次性无菌使用耗材的包装时都要在超净台内完成，并须同时保证与细菌直接接触的使用端/面不得与超净台内的任何物品发生触碰。4.1.13工作台面上的用品要放置有序、布局合理，一般说酒精灯（当工作不需要时也可不用）在中间，右手使用的物品在右侧，左手使用的物品

4、在左侧。工作时忌忙乱而要有序。4.1.14开始操作前先用医用酒精对双手进行消毒。4.1.15点燃洁净工作台内的酒精灯，在打开/关闭试剂瓶口、试管口时应将瓶口或者试管口过火；接种针、接种环在使用前或在与台面发生碰触后应经过火焰的灼烧；接种针/接种环过火操作方法为：使其头部到身部反正面在火焰上各烤燎通红；烧过的器械要冷却后才能使用，以免对细菌造成损伤。4.1.16操作前试管（或摇瓶）口需要在火焰上方反转镣铐两周。4.1.17操作时左手拿试管（或摇瓶），右手拇指、食指、中指操作接种针（接种环），右手小指和无名指夹住瓶塞，取下瓶塞，瓶塞再反转镣铐两周后开始操作。4.1.18在超净台内，尽量避

5、免瓶口长时间敞开直立。4.1.19盖封瓶口时，应将瓶口和瓶盖内面各自在火焰上燎烤两周再盖上瓶盖。4.1.20实验用胶塞、橡皮乳头等橡胶和塑料用品在过火焰时也不能时间过长，以免烧焦产生有毒气体，危害培养的细胞。4.2无菌液体标准转移程序：4.2.1无菌液体的转移须在超净台进行，转移过程要尽量保持密闭，必须用移液管或移液器来完成操作；4.2.2移液管上方口应塞入棉絮（脱脂棉），用牛皮纸包好进行消毒灭杀；4.2.3无菌液体瓶再封口时，须将瓶口和瓶盖分别燎烤2周后再封盖；封盖后须贴上相应的标签；4.2.4在使用移液管转移液体时，应保证移液管尖端距移液器边缘1cm以上；在使用移液管时，每次液体

6、吸入量不应超过移液管的警示标记，更不能触及移液管上方的防尘棉絮；在使用移液管移出废液时，移液管尖端应距废液缸5cm以上；在将细胞悬液转移至培养瓶中时，移液管尖端应距培养瓶0.5cm以上；4.2.5放置吸管时管口应向下倾斜，以防液体倒流入橡皮乳头内而引起污染或者损坏电动移液枪；4.2.6向离心管、细胞冻存管、培养瓶、培养皿内添加液态物质时，所加入的量不应超过管上所标示的最大量；4.2.7实验人员在操作时，应保证开口离心管或开口试剂的上方为不可逾越区；严格禁止采用双臂交叉的方式来拿取尚在开口状态的离心管或试剂瓶；在面向操作台工作时勿大声讲话或咳嗽，以免喷出的唾沫把细菌带入工作台面发生污染

7、；4.2.8在使用细胞刮刀时，手握部位应尽量远离培养瓶口，以防污染；4.2.9如果在转移任何液态物质的过程中出现滴漏，则应立即使用消毒液浸泡的棉球或纱布擦净；4.2.10使用完毕的实验耗材应在第一时间内处理完毕，避免堆积在超净台内或层流罩上，以防污染；4.2.11当所有操作完成后，应及时使用消毒液对台面进行清理；擦拭完毕后再开启紫外灯照射一个小时。