实验二 细菌的人工培养.ppt

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1、实验二细菌的人工培养西安医学院病原生物学与免疫学教研室目的要求掌握常用培养基的细菌接种法。掌握常用细菌生化反应的原理、检查方法。熟悉常用培养基的种类。了解细菌培养基的制备原则及其基本程序。了解细菌培养物的各种性状。Xi’anＭedicalUniversity微免教研室实验内容一、细菌的培养技术（录像）二、培养基的制备、种类及细菌的生长现象三、细菌的接种法四、细菌的生化反应Xi’anＭedicalUniversity微免教研室思考讨论何谓培养基？其制备原则是什么？常用培养基的种类及其用途？用什么方法检查细菌的动力？有何实际意义？Xi’anＭedic

2、alUniversity微免教研室实验报告1、记录细菌的生长现象。2、记录并分析细菌的生化反应。Xi’anＭedicalUniversity微免教研室培养基的制备原则二、培养基的制备、种类及细菌的生长现象1、充足的营养物质；2、合适的酸碱度；3、必须经过灭菌处理。培养基的制备过程配料、溶化、测定及矫正pH、过滤、分装、灭菌备用Xi’anＭedicalUniversity微免教研室培养基的种类（性状）二、培养基的制备、种类及细菌的生长现象液体培养基、半固体培养基、固体培养基培养基的种类（用途）1、基础培养基：如肉汤培养基2、营养培养基：如血平板3、

3、鉴别培养基：如糖发酵管4、选择培养基：如SS培养基5、厌氧培养基：如庖肉培养基Xi’anＭedicalUniversity微免教研室细菌的生长现象二、培养基的制备、种类及细菌的生长现象1、液体培养基：混浊生长、沉淀生长、菌膜生长2、半固体培养基：扩散生长、非扩散生长3、固体培养基：菌落、菌苔Xi’anＭedicalUniversity微免教研室三、细菌的接种法琼脂平板培养基的分区划线接种法琼脂斜面培养基的接种法半固体培养基接种法液体培养基接种法Xi’anＭedicalUniversity微免教研室三、细菌的接种法琼脂平板培养基的分区划线接种法琼脂

4、斜面培养基的接种法半固体培养基接种法液体培养基接种法Xi’anＭedicalUniversity微免教研室四、细菌的生化反应各种细菌具有的酶不完全相同，对营养物质的分解能力不一致，代谢产物有别。据此特点，利用生物化学方法来鉴别不同细菌，称为细菌的生化反应。Xi’anＭedicalUniversity微免教研室原理：细菌糖（醇）—→有机酸，pH↓（指示剂呈酸性反应）甲酸解氢酶甲酸————→CO2+H2（倒置小试管中有气泡）方法：大肠埃希菌、伤寒沙门菌分别接种于葡萄糖、乳糖等发酵管，37℃培养18h～24h观察。结果：糖发酵试验四、细菌的生化反应Xi

5、’anＭedicalUniversity微免教研室四、细菌的生化反应糖发酵试验Xi’anＭedicalUniversity微免教研室四、细菌的生化反应靛基质（吲哚）试验原理：细菌吲哚试剂色氨酸—→吲哚———→玫瑰吲哚方法：大肠埃希菌、伤寒沙门菌分别接种于蛋白胨水，37℃培养18h～24h后，加入吲哚试剂观察。结果：Xi’anＭedicalUniversity微免教研室四、细菌的生化反应靛基质（吲哚）试验(+)(—)Xi’anＭedicalUniversity微免教研室四、细菌的生化反应硫化氢试验原理：细菌含硫氨基酸—→H2S+FeSO4—→FeS

6、↓（黑色）方法：大肠埃希菌、肖氏沙门菌分别接种于硫酸亚铁培养基，37℃培养18h～24h观察。结果：Xi’anＭedicalUniversity微免教研室四、细菌的生化反应硫化氢试验(+)(—)Xi’anＭedicalUniversity微免教研室I-吲哚（indol）试验M-甲基红（methylred）试验Vi-VP（Voges-Proskauer）试验C-枸橼酸盐利用（citrateutilization）试验四、细菌的生化反应IMViC试验Xi’anＭedicalUniversity微免教研室四、细菌的生化反应葡萄糖↓——————丙酮酸——

7、————↓↓乙酰甲基甲醇（pH﹥5.4）混合酸（pH﹤4.5）↓↓——————↓←甲基红指示剂↓↓←KOH+空气↓丁二醇双乙酰↓↓←α-萘酚+肌酸↓红色化合物红色（VP试验阳性）（甲基红试验阳性）VP试验与甲基红试验原理Xi’anＭedicalUniversity微免教研室方法：大肠埃希菌、产气杆菌分别接种于葡萄糖蛋白胨水，37℃培养18h～24h后，按每毫升培养基加入含0.3%肌酸或肌酐的0.1ml40%KOH溶液，48℃～50℃水浴2h或37℃4h，充分摇动后观察。方法：大肠埃希菌、产气杆菌分别接种于葡萄糖蛋白胨水，37℃培养18h～24h后

8、，滴加甲基红指示剂观察结果。四、细菌的生化反应VP试验甲基红试验Xi’anＭedicalUniversity微免教研室四、细菌的生化反应