细胞培养知识讲课稿.doc

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1、细胞培养知识细胞培养知识VERO细胞培养、纯化灭活的狂犬病毒vero细胞　　Vero细胞被成功的用来培养狂犬病疫苗、乙脑疫苗等多种疫苗，在非典期间又为研究冠状病毒做出贡献，在医药研究种广泛应用。来源：非洲绿猴肾细胞形态：上皮细胞生长特性：贴壁注释：该细胞是日本千叶大学的Y.Yasumura和Y.Kawakita于1962年3月27日从一只正常的成年非洲绿猴肾组织培养出来的。培养液：MEM（含2mML-谷氨酰胺和Earle'sBSS，1.5g/LNaHCO3,0.1mM非必需氨基酸,1.0mM丙酮酸钠），10%胎牛血清传代：吸去培养液。用0.25%(w/v)Trypsin-0.53mM

2、EDTA洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶的活性）。加2-3毫升Trypsin-EDTA，放在37℃培养箱内约5分钟，直到细胞全部脱落。加6-8毫升培养液，用移液器把细胞吹散。加适量的细胞到新的培养器皿中。（以1:3至1:6为宜，传代期间培养液每周更换2-3次）冻存：95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。CHO-K1细胞　　CHO-K1细胞是实验中非常常用的一个细胞株，在生物制药中使用也非常广泛。该细胞株培养条件简单，贴壁强度适中，比较容易转染，很适合用它来研究一般哺乳动物基因的功能。来源：Cricetulusgriseus(中国仓鼠)卵巢形态：表皮细胞生长特性：贴壁注释：CHO-K

3、1由CHO衍生而来，CHO是T.T.Puck在1957年从一只成年中国仓鼠卵巢获得的（1）。培养液：Ham'sF12K（含2mML-谷氨酰胺，1.5g/LNaHCO3），10%胎牛血清。传代：吸去培养液。用0.25%(w/v)Trypsin-0.53mMEDTA洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶的活性）。加2-3毫升Trypsin-EDTA，放在37℃培养箱内约5分钟，直到细胞全部脱落。加6-8毫升培养液，用移液器把细胞吹散。加适量的细胞到新的培养器皿中。（以1：4到1：8为宜，传代期间培养液更换1-2次）冻存：95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。1.PuckTT,etal.Gen

4、eticsofsomaticmammaliancellsIII.Long-termcultivationofeuploidcellsfromhumanandanimalsubjects.J.Exp.Med.108:945-956,1958.PubMed:13598821293细胞　　293细胞比较容易转染，是一个很常用的表达研究外源基因的细胞株。293细胞的一个衍生株：293T/17的转染效率更高，成为广大研究者研究基因功能的一个强大工具。　　293细胞的缺陷是生长过程中贴壁强度比较小。所以在实验过程中容易流失，从而影响实验结果。如果一个实验室新得到的293细胞是邮寄得到的并且细胞在

5、培养瓶中，就需要让细胞沉降几天时间，因为大量细胞会漂浮在培养液里。来源：人体肾脏形态：上皮细胞生长特性：贴壁注释：该细胞含腺病毒5DNA。培养液：MEM（含2mML-谷氨酰胺和Earle'sBSS，1.5g/LNaHCO3,0.1mM非必需氨基酸,1.0mM丙酮酸钠），10%马血清（热灭活）。传代：吸去培养液。用0.25%(w/v)Trypsin-0.53mMEDTA洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶的活性）。加2-3毫升Trypsin-EDTA，放在37℃培养箱内约5分钟，直到细胞全部脱落。加6-8毫升培养液，用移液器把细胞吹散。加适量的细胞到新的培养器皿中。（以1：2到1：4为宜

6、，传代期间培养液2-3天更换1次）冻存：95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。NIH-3T3细胞　　NIH-3T3细胞在实验室常用来做转染及基因表达的研究。易感病毒有鼠肉瘤病毒和鼠白血病毒。来源：Musmusculus（小家鼠）胚胎形态：成纤维细胞样生长特性：贴壁注释：为得到适合转染得细胞株，NIH-3T3细胞至少连续克隆过5次。NIH-3T3细胞容易转染DNA，鼠痘病毒阴性。培养液：DMEM（含4mML-谷氨酰胺、4.5g/L葡萄糖、1.5g/L碳酸氢钠），10%小牛血清传代：吸去培养液。（不要让细胞长满培养器皿，长满80%为宜）用0.25%(w/v)Trypsin-0.53mME

7、DTA洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶的活性）。加2-3毫升Trypsin-EDTA，放在37℃培养箱内约5分钟，直到细胞全部脱落。加6-8毫升培养液，用移液器把细胞吹散。加适量的细胞到新的培养器皿中。（以3-5x103/cm2为宜，传代期间培养液每周更换2次）冻存：95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。PC-12细胞PC-12细胞是一个常用的神经细胞株。来源：Rattusnorvegicus(褐家鼠)肾上腺嗜铬细胞瘤（一种交感神经系统的肿瘤）形态：多角