生物技术专业复习资料(西南民大版)生物工程下游技术全面复习。。。教学内容.doc

《生物技术专业复习资料(西南民大版)生物工程下游技术全面复习。。。教学内容.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、生物技术专业复习资料(西南民大版)生物工程下游技术全面复习。。。精品文档1、沉淀法的目的：a.通过沉淀达到浓缩的目的；b.沉淀方法可有选择地沉淀杂质或有选择地沉淀所需成分.初步纯化c.将已纯化的产品由液态变成固态，加以保存或进一步处理。2、沉淀法的操作步骤：①首先加入沉淀剂，②沉淀剂的陈化，促进粒子生长；③为离心或过滤，收集沉淀物。3、沉淀法的分类：根据所加入的沉淀剂的不同，沉淀法可以分为：（1）盐析法；（2）等电点沉淀法；（3）有机溶剂沉淀法；（4）非离子型聚合物沉淀法；（5）聚电解质沉淀法；

2、（6）复合盐沉淀法等；（7）亲和沉淀法；（8）选择性变性沉淀法。4、盐析法机理：（1）破坏水化膜（2）中和电荷，减少静电斥力5、盐析用盐的选择：盐析作用要强；盐析用盐需有较大的溶解度；盐析用盐必须是惰性的；来源丰富、经济6、硫酸铵是最常用的蛋白质盐析沉淀剂：（1）价廉；（2）溶解度大，温度系数小，许多蛋白质可以盐析出来；（3）硫酸铵分段盐析效果也比其他盐好，（4）不易引起蛋白质变性。7、用盐析法分离蛋白质的两种方法：Ks分段盐析法，在一定pH和温度下通过改变离子强度实现；β分段盐析法，在一定离子

3、强度下通过改变pH和温度来实现8、盐析法特点：a.成本低，不需要特别昂贵的设备。b.操作简单、安全。c.不会引起蛋白质变性，经透析去盐后，能得到保持生物活性的纯化蛋白质。d.分离效果不理想，通常只是作为初步的分离纯化，还需要结合其它的纯化方法。收集于网络，如有侵权请联系管理员删除精品文档9、等电点沉淀：在低的离子强度下，调pH至等电点，使蛋白质所带净电荷为零，降低了静电斥力，而疏水力能使分子间相互吸引，形成沉淀的操作称为等电点沉淀。10、亲和过程提供了一个从复杂混合物中分离提取单一产品的有效方法

4、。11、溶剂萃取法是利用一种溶质组分(如产物)在两个互不相溶的液相(如水相和有机溶剂相)中竞争性溶解和分配性质上的差异来进行分离的操作。优点：比化学沉淀法分离程度高；比离子交换法选择性好、传质快；比蒸馏法能耗低。另外它还有生产能力大、周期短、便于连续操作、容易实现自动化控制等优点。12、“相似相溶”原理:“相似”一是分子结构相似，如分子的组成、官能团、形态结构的相似；二是能量(相互作用力)相似，如相互作用力有极性的和非极性的之分，两种物质如相互作用力相近，则能互相溶解。13、多级错流萃取：优点：

5、由几个单级萃取单元串联组成，萃取剂分别加入各萃取单元；萃取推动力较大，萃取效率较高；缺点：仍需加入大量萃取剂，因而产品浓度稀，需消耗较多能量回收萃取剂。14、多级逆流萃取：由几个单级萃取单元串联组成，料液和萃取剂分别从两端连续加入，互成逆流接触；15、超临界流体：当一种物质处于其临界点以上的温度和压力之下，则称之为超临界流体。16、超临界流体特点：密度大，粘度小；密度接近液体－－萃取能力强；粘度接近气体－－传质性能好，高扩散性能收集于网络，如有侵权请联系管理员删除精品文档11、双水相萃取蛋白质受

6、到重视。其操作是向水相中加入溶入水的高分子化合物，形成密度不同的两相，轻相富含某一种高分子化合物；重相富含盐类或另一种高分子化合物。因两相均含有较多的水，所以称之为双水相萃取。12、多级萃取：细胞匀浆液中目标产物经过多步萃取，可获得较高纯化倍数。第1步萃取使细胞碎片、大部分杂蛋白和核酸、多糖等副产物分配于下相，目标产物分配于上相。如目标产物尚未达到所需纯度，向上相中加入盐重新形成双水相，进行第2步萃取，可除去大部分多糖和核酸。第3步萃取则使目标产物分配于盐相，以使目标产物与PEG分离，便于PEG

7、的重复利用和目标产物的进一步加工处理。19、电泳：在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的作用下，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象20、醋酸纤维素薄膜电泳：电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、染色、脱色与透明即可得到满意的分离效果。此电泳的特点是分离速度快、电泳时间短、样品用量少。因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。21、等电聚焦（isoelectrofocusing）,IEF：利用蛋白质分子或其它两性分子的等电点不同，在一个稳定的、连续的、线性的pH梯度中进行蛋白质

8、的分离和分析。22、双向凝胶电泳：第一向采用等电聚焦根据复杂的蛋白质成分中各个蛋白质的PI的不同，将蛋白质进行分离。第二向采用了十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）就是按蛋白质分子量的大小使其在垂直方向进行分离。其结果不再是条带状，而是呈现为斑点状。收集于网络，如有侵权请联系管理员删除精品文档23、培养细胞生长条件：细胞的营养需要；细胞的生存环境（温度:37℃、O2、CO2:5%、CO2+H2O←→H2CO3←→H++HCO3-、pH:7.2-7.4、渗透压）；无污染；无毒24