行业标准：GB-T17999.6-1999 SPF鸡 胚敏感试验.pdf

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1、GB/'r17999.6-1999前言禽脑脊髓炎病毒(AEV)感染常用的监测方法有琼脂扩散试验(AGP)和胚敏感试验(ES)二者均可对AEV感染做出确诊ES已在我国SPF鸡场的AE监测中得到应用和验证，本标准在此基础上，规定rSPF鸡胚敏感试验SPF鸡微生物学质量控制国家系列标准，包括SPF鸡微生物学监测总则和9种SPF鸡微生物学检测方法本标准为《SPF鸡胚敏感试验》。SPF鸡微生物学检测方法还包括以下部分:(:B/T17999.1一1999SPF鸡红细胞凝集抑制试验;GB/T17999.2-1999

2、SPF鸡血清中和试验;GB厂I'17999.3-1999SPF鸡血清平板凝集试验;GB/T17999.4-1999SPF鸡琼脂扩散试验;GB/T17999.5-1999SPF鸡酶联免疫吸附试验;GB/T17999.7--1999SPF鸡鸡白痢沙门氏菌检验;(_;ii/,r17999.8--1999SPF鸡试管凝集试验;GB/T17999.9-1999SPF鸡('H1接免疫荧光试验本标准山中华人民共和国农业部、国家科学技术部提出本标准由农业部畜牧兽医司归口。本标准起草单位:农业部实验动物研究中心、山东省

3、农科院家禽研究所。本标准主要起草人:赵立红、陈德威、张秀美、张冰、李军。中华人民共和国国家标准GB/T17999.6一1999SPF鸡胚敏感试验SPFchicken-Embryosusceptibilitytest1范围本标准规定了胚敏感试验所用试剂、材料，操作程序及结果判定等。本标准适用于SPF鸡感染禽脑脊髓炎病毒后的抗体监测。2原理VanRoekel毒株是禽脑脊髓炎病毒的一株胚适应毒株，具有高度嗜神经性。对非免疫鸡群的鸡胚有致病性，引起肌肉营养不良、运动性降低、足趾卷曲等特征性病变。免疫鸡群的鸡胚

4、对经卵黄囊接种的病毒有抵抗力。3试剂和器材3.1试剂3.1.1AE-VanRoekel病毒(0.2ml含100EIDso)3.1.2SPF蛋3.1.3被检蛋。3.2器材3.2.11ml注射器3.2.27“针头3.2.3恒温培养箱3-2-4超净工作台。3.2.5小型孵化器操作程序取被检蛋及SPF蛋孵至6日龄。:.;取6日龄被检鸡胚，每胚经卵黄囊接种。.2m工_含100EIDso的AE-VanRoekel病毒液，接种完毕用蜡封孔，同时取6日龄SPF鸡胚接种与不接种病毒作为对照4.3接种后的鸡胚，置37'C

5、-37.5'C孵化器中孵化，每天照蛋一次，取出死亡鸡胚，接种后第12d取出全部鸡胚待检4.4观察病变:非免疫鸡的鸡胚感染VanRoekel后出现特征性病变，早期为胸腹部肌肉、皮下水肿，当接种后iod--12d解剖活胚时，见腿肌萎缩、足趾卷曲，注意与接种、不接种SPF对照鸡胚对比观察。5结果判定5.1当接种SPF对照鸡胚均呈禽脑脊髓炎病毒所致的特异病变，不接种SPF对照鸡胚无特异病变时，国家质量技术监督局1999一11一10批准2000一04一01实施cs/T17999.6一1999试验结果可靠。5.2

6、判定阴性:100%鸡胚有特征性病变，表明此鸡群无禽脑脊髓炎病毒抗体，属非感染鸡群。阳性50%以下的鸡胚有特征性病变，表明此鸡群有禽脑脊髓炎病毒抗体，属感染鸡群。