行业标准：GBT 28064-2011 蚕豆染色病毒检疫鉴定方法.pdf

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1、ICS65．020．01B16a雪中华人民共和国国家标准GB／T28064—2011蚕豆染色病毒检疫鉴定方法Detectionandidentificationofbroadbeanstainvirus2011-12-30发布2012-06-01实施宰瞀髁紫瓣警糌瞥篓发布中国国家标准化管理委员会履111刚置GB／T28064--2011本标准按照GB／T1．1—2009给出的规则起草。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC／TC271)提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国厦门出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。本标准主要起草

2、人：陈红运、陈青、林石明、郑耘、赵文军、李一农、廖富荣、余芳平、朱水芳、陈枝楠。1范围蚕豆染色病毒检疫鉴定方法GB／T28064--2011本标准规定了蚕豆染色病毒的血清学和分子检测方法。本标准适用于蚕豆Vicia丘ba、小扁豆Lensculinaris、豌豆Pisumsativum和菜豆Phaseolusvulgaris种子携带蚕豆染色病毒的检疫鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。SN／T2122进出境植物及植物产品检疫抽样3蚕豆染色病

3、毒基本信息中文名：蚕豆染色病毒。学名：broadbeanstainvirus。缩写：BBSV。属豇豆花叶病毒科Comoviridae；豇豆花叶病毒属Comovirus。病株花粉可通过授粉将病毒传至健株种子；远距离通过种子传播，种传寄主有蚕豆(种传率4％～16％)、豌豆(20％)和小扁豆(o．2％～32．4％)。BBSV易机械接种传播，并可通过甲虫传毒，豆长喙象甲Apion"OOTO,X是最主要的传毒介体。蚕豆染色病毒的其他信息参见附录A。4方法原理主要根据BBSV的血清学特性和基因组特征进行鉴定，生物学测定为辅助鉴定手段。5仪器、设施及试剂5．1仪器与设施酶联检测仪、电子天平(

4、感量0．0001g)、定性PCR仪、电泳仪、电泳槽、紫外透射仪、恒温水浴、低温冰箱、普通冰箱、离心机等；微量移液器(2．5止，10pL，20pL，100v-L，200PL，1000pL)；酶联板、研钵等；防虫温室。5．2试剂酶联免疫吸附测定试剂(见附录B)、RT-PCR检测试剂(见附录c)。GB／T28064--20116检测与鉴定6．1抽样按照sN／T2122的规定执行。6．2制样选取种皮呈BBSV为害症状的可疑病粒，无可疑病粒时随机选取。用无菌水授种16h，磁盘中放人两层吸满水的滤纸，将充分吸水的种子摆放在滤纸上，20℃催芽，芽长2cm～4cm时取芽进行检测。检测方法见6．

5、3。注：资源性引种时，每份资源选10粒～14粒种子播种于防虫温室或网室内，待长出4片～6片叶时挑选有病毒症状植株的叶片进行检测。6．3检测6．3．1酶联免疫吸附测定双抗体夹心法见附录B。6．3．2RT-PCR检测称取0．1g植物组织提取总RNA，沉淀充分干燥后溶于30”LDEPC处理的去离子水中。RT-PCR检测方法见附录c。6．3．3生物学测定生物学测定参见附录D。7结果判定与记录7．1结果判定酶联测定为阳性后，RT-PCR检测结果呈阴性或者鉴别寄主反应与附录D描述不符合，判定未检出蚕豆染色病毒。酶联测定为阳性后，RT-PCR检测结果呈阳性或者鉴别寄主反应与附录D描述相符合，

6、判定检出蚕豆染色病毒。直接对样品进行RT-PCR检测时，检测结果呈阳性即可判定检出蚕豆染色病毒。7．2结果记录记录包括：样品来源、种类、取样人员、原始记录和检测结果等。酶联测定应有酶联板反应的原始数据，RT-PCR检测应有电泳结果图片，生物学测定应有鉴别寄主的症状照片。8样品保存经检验确定携带蚕豆染色病毒的样品应在合适的条件下保存，种子保存在4℃，病株在一20℃或者--80℃冰箱中保存，做好标记和登记工作。A．1寄主范围附录A(资料性附录)蚕豆染色病毒寄主、分布及危害症状GB／T28064—2011BBSV侵染7种豆科植物：美丽猪屎豆(cr0￡dz4r缸spectabilis)

7、、毛羽扇豆_(Lupinushirsutus)、白花草木犀(Melilotusalba)、菜豆、豌豆、绛车轴草(Trifoliumincarnatum)和蚕豆。A．2病害症状A．2．1蚕豆蚕豆感染BBSV后，症状分为花叶型和坏死型。花叶型表现为接种叶片上有或无局部斑，新叶均呈褪绿条纹状、环状和块状花叶片上出现褪绿斑驳和花叶症状；坏死型表现为接种叶片有或无黄化或局部斑，叶脉和茎出现坏死条纹，最后茎坏死、顶枯、全株萎蔫。种子表皮出现褐色坏死色斑。A．2．2豌豆豌豆感染BBSV后，症状分为花叶型、